羔羊JIVET相關(guān)技術(shù)及影響其卵母細(xì)胞發(fā)育功能基因的研究.pdf

1、幼畜體外胚胎生產(chǎn)和移植技術(shù)(JIVET)是集成了幼齡母畜超數(shù)排卵技術(shù)、卵母細(xì)胞體外成熟技術(shù)、體外受精技術(shù)、胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)等一系列繁殖技術(shù)為一體的生物技術(shù)體系。JIVET技術(shù)將幼齡母畜卵巢上大量的卵母細(xì)胞為卵源在體外培養(yǎng)生產(chǎn)胚胎，有利于縮短家畜繁殖的世代間隔，充分發(fā)掘優(yōu)良遺傳性狀母畜的繁殖潛能，提高畜群的遺傳改良速度與生產(chǎn)效率，為家畜育種提供豐富的遺傳資源。體外成熟是JIVET技術(shù)的一個重要環(huán)節(jié)，通過調(diào)節(jié)激素濃度等手段來提

2、高體外成熟培養(yǎng)效果以達(dá)到細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核共同成熟的目標(biāo)，能顯著提高后期胚胎生長發(fā)育的潛力，極大地提高.JIIVET技術(shù)的生產(chǎn)效率。
　　本研究以海安縣當(dāng)?shù)氐拈L江三角洲白山羊羔羊為主要研究對象，經(jīng)羔羊屠宰場取卵后進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)，然后對培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精。在成熟培養(yǎng)液里添加不同濃度的FSH+LH（2.5、5.0、7.5、10.0、12.5μg/mL），以研究FSH+LH濃度對卵母細(xì)胞成熟率的影響，旨在不斷完善培養(yǎng)體系，并且

3、對比羔羊與成年母羊的早期胚胎發(fā)育能力，來探究卵母細(xì)胞成熟的調(diào)控機制。本試驗運用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)篩選影響羔羊卵母細(xì)胞成熟的關(guān)鍵基因，并通過實時熒光定量技術(shù)對篩選出來的五個基因（MOS、RPS6KA1、CPEB1、ANAPC13和CDK1）進(jìn)行定量驗證，從分子水平研究卵母細(xì)胞成熟的調(diào)控機制，以期提高羔羊卵母細(xì)胞發(fā)育到后期胚胎的潛力。本次研究結(jié)果如下:
　　1、在成熟液里添加FSH+LH濃度分別為2.5、5.0、7.5、10.0、1

4、2.5μg/mL進(jìn)行分組成熟培養(yǎng)后，其結(jié)果顯示成熟液中添加不同濃度FSH+LH對卵母細(xì)胞成熟率有明顯的影響。其中5.0μg/mLFSH+LH組的羔羊卵母細(xì)胞成熟率明顯高于其他四組;10.0μg/mLFSH+LH組的成年母羊卵母細(xì)胞成熟率明顯高于其他四組;而且羔羊和成年母羊卵母細(xì)胞在相同濃度FSH+LH的成熟液中培養(yǎng)效果無顯著差異。
　　2、在相同條件下體外受精后，對羔羊和成年母羊卵母細(xì)胞的卵裂率、4細(xì)胞率、8細(xì)胞率、16細(xì)胞率、囊

5、胚率進(jìn)行統(tǒng)計分析，其結(jié)果顯示羔羊和成年母羊卵母細(xì)胞的卵裂率、4細(xì)胞率無顯著差異，羔羊卵母細(xì)胞的8細(xì)胞率顯著低于成年母羊，羔羊卵母細(xì)胞的囊胚率極顯著低于成年母羊。
　　3、采用單細(xì)胞測序技術(shù)對羔羊和成年母羊成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組差異分析，篩選出MOS、RPS6KA1、CPEB1、ANAPC13和CDK1這5個重要的表達(dá)差異基因，并通過實時熒光定量技術(shù)驗證了轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。通過總結(jié)與這五個基因有關(guān)的研究表明，MOS、RPS6