線粒體移植對(duì)水牛卵母細(xì)胞發(fā)育潛能影響的初步研究.pdf

1、分類號(hào)——UDC密級(jí)碩士學(xué)位論文線粒體移植對(duì)水牛卵母細(xì)胞發(fā)育潛能影響的初步研究高亞可論文答辯日期2Q!三生魚月3目學(xué)位授予日期線粒體移植對(duì)水牛卵母細(xì)胞發(fā)育潛能影響的初步研究摘要本研究以水牛卵泡顆粒細(xì)胞作為線粒體的來源細(xì)胞，初步探討水牛卵母細(xì)胞進(jìn)行線粒體移植(MIT)對(duì)其發(fā)育潛能的影響，以期提高水牛卵母細(xì)胞的質(zhì)量和胚胎的發(fā)育能力。首先，探討了水牛卵泡顆粒細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法及線粒體活性的檢測(cè)。結(jié)果顯示：從卵泡液中分離得到的顆粒細(xì)胞活率為60

2、％左右；采用DMEM培養(yǎng)基，顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)狀態(tài)優(yōu)于TCM199和DMEM／F12培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)24h后開始零星增殖，3“～5d增殖速度達(dá)到高峰；分別對(duì)第1、3、5、7代顆粒細(xì)胞的核型、凋亡率及其線粒體活性分析發(fā)現(xiàn)：第1、3、5、7代顆粒細(xì)胞正常核型比率差異不顯著，均在85％以上；第l代顆粒細(xì)胞的凋亡率(767023％)與第三代(7621：036％)差異不顯著，但與第5代(826土O19％)和第7代(935士047％)相比，顆

3、粒細(xì)胞的凋亡率顯著上升(PO05)；而線粒體的活性會(huì)隨著顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)代數(shù)的增加呈下降趨勢(shì)。其次，研究了水牛卵母細(xì)胞質(zhì)量及發(fā)育潛能與線粒體DNA(mtDNA)拷貝數(shù)的關(guān)系。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QRTPCR)技術(shù)對(duì)體外成熟不同級(jí)別卵母細(xì)胞的mtDNA拷貝數(shù)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)合不同級(jí)別卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎的發(fā)育情況，分析卵母細(xì)胞質(zhì)量及發(fā)育潛能與線粒體DNA(mtDNA)拷貝數(shù)的關(guān)系。結(jié)果顯示：一級(jí)卵母細(xì)胞組的平均mtDNA拷貝數(shù)極顯著高于二