CTSB、CTSS基因表達與綿羊卵丘細胞凋亡及卵母細胞發(fā)育能力相關(guān)性研究.pdf

1、本研究通過qRT-PCR技術(shù)檢測成年綿羊和羔羊卵丘細胞內(nèi)組織蛋白酶(CTSB、CTSS)基因表達規(guī)律，Tunel染色并結(jié)合流式細胞儀檢測卵丘細胞凋亡，研究成熟培養(yǎng)液中添加不同濃度組織蛋白酶特異性抑制劑E-64對卵丘細胞凋亡及卵母細胞發(fā)育能力的影響。探究CTSB、CTSS基因表達、綿羊卵丘細胞凋亡與卵母細胞發(fā)育能力相關(guān)性，以期探索提高綿羊卵母細胞成熟及發(fā)育潛能的新途徑。研究結(jié)果如下:
　　成年綿羊與羔羊卵母細胞體外成熟液中添加不同濃

2、度的E-64(0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)，分別于體外成熟(IVM)的0h、8h、16h、24h檢測組織蛋白酶基因表達量，結(jié)果表明:成年綿羊及羔羊卵丘細胞內(nèi)CTSB、CTSS基因表達量在體外成熟過程中，隨時間的延長而逐漸下降;E-64添加組卵丘細胞內(nèi)CTSB、CTSS基因表達量均在不同程度上低于對照組，其中5μmol/L和10μmol/L組于IVM8h、16h、24h基因表達量與對照組相比，被顯著下

3、調(diào)(p＜0.05)，5μmol/L和10μmol/L組間差異不顯著（P＞0.05）。
　　卵母細胞體外成熟液中添加不同濃度E-64(0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)，于體外成熟的不同時間點(成年羊于IVM的0h、8h、16h、24h;羔羊于IVM的0h、24h)檢測卵丘細胞凋亡，結(jié)果表明:成年綿羊與羔羊卵丘細胞累積凋亡率與體外成熟時間呈正相關(guān);成年綿羊體外成熟過程中新生凋亡率呈現(xiàn)先逐漸升高， IV

4、M16h達到高峰，再逐漸降低的規(guī)律;成熟液中添加E-64可以下調(diào)卵丘細胞的凋亡水平，具有劑量依賴性的特點，添加5μmol/L、10μmol/L E-64對卵丘細胞凋亡的抑制效果顯著高于0μmol/L和1μmol/L組(p＜0.05)，但5μmol/L和10μmol/L E-64組間無顯著差異（P＞0.05）。
　　將羔羊與成年綿羊卵丘細胞內(nèi)CTSB、CTSS基因表達量及凋亡進行對比，結(jié)果表明，羔羊卵丘細胞內(nèi)CTSB、CTSS的mR

5、NA表達量均極顯著高于成年綿羊(p＜0.01);IVM0h羔羊卵丘細胞累積凋亡率極顯著高于成年綿羊(P＜0.01);24h時，對照組羔羊卵丘細胞累積凋亡率顯著高于成年羊(P＜0.05)，5μmol/L、10μmol/L E-64添加組則極顯著高于成年羊（P＜0.01）。
　　成熟液中添加不同濃度E-64(0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)，分別培養(yǎng)成年綿羊卵母細胞，成熟后的卵母細胞經(jīng)體外受精和胚胎發(fā)