脫卵丘操作對(duì)家兔卵母細(xì)胞損傷的研究.pdf

1、脫去卵母細(xì)胞外的卵丘細(xì)胞后進(jìn)行成熟培養(yǎng)是生發(fā)泡移植及研究卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞作用等實(shí)驗(yàn)所必需的。對(duì)牛和小鼠等動(dòng)物的研究說明，脫去卵丘的裸卵(DO)能夠體外成熟和發(fā)育，盡管發(fā)育能力低于卵丘完好的卵丘一卵母細(xì)胞復(fù)合體(COC)。而且，與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)可部分恢復(fù)這些動(dòng)物DO的成熟和發(fā)育能力。然而，我們在研究中卻發(fā)現(xiàn)，家兔卵母細(xì)胞一旦脫掉卵丘則失去體外成熟能力。因此，我們懷疑脫卵丘的操作過程可能對(duì)兔卵母細(xì)胞造成了比其它動(dòng)物更嚴(yán)重的不可逆損傷。在生

2、發(fā)泡期，放射冠細(xì)胞和卵母細(xì)胞之間是通過連接子形成的縫隙連接進(jìn)行物質(zhì)交流。因此，通過機(jī)械的方法脫卵丘可能會(huì)對(duì)卵母細(xì)胞質(zhì)膜產(chǎn)生影響。另外，已證明在用細(xì)玻璃管進(jìn)行脫卵丘時(shí)可能會(huì)對(duì)卵母細(xì)胞產(chǎn)生一種剪切力，引起卵母細(xì)胞的凋亡。針對(duì)這些問題，本研究以家兔和小鼠卵母細(xì)胞為模型對(duì)比研究了脫卵丘操作對(duì)卵母細(xì)胞成熟和發(fā)育能力的影響。研究結(jié)果表明： 1.庚醇阻斷實(shí)驗(yàn)表明卵丘細(xì)胞影響兔卵母細(xì)胞的核成熟和卵裂，不影響隨后的胚胎發(fā)育能力：但卵丘細(xì)胞不影響小

3、鼠卵母細(xì)胞的核成熟，而影響卵母細(xì)胞孤雌激活后的胚胎發(fā)育能力。 2.脫卵丘和共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞作用的發(fā)揮需要放射冠細(xì)胞和卵母細(xì)胞之間保持完整的縫隙連接。 3.在縫隙連接被完全阻斷即卵丘細(xì)胞的作用被完全去除時(shí)，大約50％的兔卵母細(xì)胞能成熟，而在完全脫去卵丘細(xì)胞后兔卵母細(xì)胞幾乎不能成熟，說明脫卵丘操作嚴(yán)重?fù)p傷了兔卵母細(xì)胞，導(dǎo)致卵母細(xì)胞不成熟；但在縫隙連接被完全阻斷時(shí)，小鼠卵母細(xì)胞的發(fā)育能力和DO差異不顯著，表明脫

4、卵丘操作沒有影響小鼠卵母細(xì)胞。 4.Hoechst33258染色實(shí)驗(yàn)表明，脫卵丘操作損傷了兔卵母細(xì)胞的質(zhì)膜，這部分受損的卵母細(xì)胞在培養(yǎng)過程中退化；但脫卵丘操作卻沒有損傷小鼠卵母細(xì)胞的質(zhì)膜，因此培養(yǎng)過程中小鼠卵母細(xì)胞不退化。 5.Bcl-2抗體染色實(shí)驗(yàn)表明，脫卵丘操作會(huì)導(dǎo)致兔卵母細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá)水平下降，引起卵母細(xì)胞的凋亡；脫卵丘后小鼠胞質(zhì)中Bcl-2的表達(dá)水平與對(duì)照組COC差異不顯著，所以這一操作過程沒有影響小鼠卵