綿羊卵母細胞體外成熟培養(yǎng)及冷凍保存研究.pdf

1、卵母細胞冷凍研究在家畜遺傳資源保存方面具有廣泛和潛在的應(yīng)用價值，通過對綿羊卵母細胞冷凍保存的研究，探討和建立綿羊卵母細胞冷凍保存的最佳條件和可行技術(shù)路線。本研究以地方綿羊品種為研究對象，利用屠宰場廢棄的綿羊卵巢獲取卵母細胞，進行體外成熟培養(yǎng)和冷凍保存研究。體外成熟培養(yǎng)主要從采集方法、激素配比、性周期階段、卵丘細胞、添加谷氨酰胺、表皮生長因子(EGF)等方面進行了探討；冷凍保存主要從冷凍保護劑、冷凍方法、卵母細胞不同發(fā)育階段、CB處理以及

2、解凍方法等方面進行了研究。試驗研究結(jié)果指出： 1.不同采卵方法在采卵效果上存在差異。綜合法和切割法從每個卵巢上得到的可用卵母細胞數(shù)為1.71和1.58，顯著高于抽吸法(0.92，P＜0.05)；成熟率切割法和綜合法與抽吸法之間沒有差異顯著性(58.9﹪、62.3﹪、62.0﹪；P＞0.05)，但受精后卵裂率都顯著高于抽吸法(28.6﹪、49.5﹪、45.8﹪；P＜0.05)。 2.四組不同激素配比成熟率分別為55.6﹪、

3、67.2﹪、66.7﹪、73.8﹪，D組成熟率極顯著高于A組(P＜0.01)，A組與B組之間差異顯著(P＜0.05)；卵裂率各組為32.9﹪、42.4﹪、40.7﹪、45.2﹪，無差異顯著性，但呈升高趨勢，D組激素配比進行卵母細胞成熟培養(yǎng)效果最佳。 3.A、B、C三級卵母細胞的成熟率分別為75.3﹪、64.4﹪、29.1﹪，A、B級卵母細胞成熟率顯著高于C級(P＜0.01)；卵裂率分別為42.5﹪、35.8﹪、16.0﹪，A級與

4、B級之間差異不顯著，但均顯著高于C級(P＜0.05)。 4.從卵泡期和黃體期卵巢采集到的卵母細胞的體外成熟率和卵裂率分別為67.1﹪、63.0﹪；42.9﹪、41.3﹪，沒有差異顯著性(P＞0.05)。 5.添加不同濃度的谷氨酰胺并沒有顯著增加綿羊卵母細胞的體外成熟率以及卵裂率，各組與對照組之間差異不顯著(P＞0.05)。 6.添加100ng/mlEGF可顯著提高卵母細胞成熟率(72.4﹪vs56.8﹪，P＜0.

5、05)和卵裂率(46.0﹪vs25.9﹪，P＜0.05)。 7.EG、DMSO和GL三種保護劑程序化冷凍卵母細胞后體外成熟率分別為21.9﹪、18.3﹪、8.97﹪，冷凍效果EG＞DMSO＞GL，EG與GL之間差異顯著(P＜0.05)；不同冷凍劑組合玻璃化冷凍卵母細胞后成熟率分別為39.1﹪、26.0﹪、24.7﹪，(EG+DMSO)組＞(EG+GL)組＞(GL+DMSO)組，(EG+DMSO)組和(GL+DMSO)組之間差異顯

6、著(P＜0.05)；三種組合不同發(fā)育階段卵裂率分別為20.6﹪、30.5﹪、16.0﹪、25.3﹪、9.09﹪、20.4﹪，與對照組相比較差異極顯著(P＜0.01)，GV期卵母細胞冷凍后卵裂率均低于MII期。 8.不同方法冷凍卵母細胞組發(fā)育效果上存在差異。程序化冷凍組GV期、MII期卵母細胞解凍后形態(tài)正常率(54.8﹪、67.2﹪)均顯著低于OPS冷凍法(78.3﹪、84.8﹪，P＜0.05)，且GV期解凍后卵母細胞形態(tài)正常率與

7、OPS冷凍組差異極顯著(P＜0.01)，程序化冷凍組顯著低于細管玻璃化和OPS玻璃化冷凍組(14.7﹪vs29.5、35.4﹪，P＜0.05)，與對照組相比較均差異極顯著(P＜0.01)；三種冷凍方法冷凍GV期、MII期卵母細胞受精后卵裂率為10.3﹪、16.7﹪、23.7﹪、26.1﹪、31.3﹪，均極顯著低于對照組(57.8﹪，P＜0.01)。 9.CB處理與否對綿羊卵母細胞冷凍效果沒有顯著影響(P＞0.05)。 1