卵母細(xì)胞體外成熟及人胚胎玻璃化冷凍的研究.pdf

1、本文從如下幾方面就卵母細(xì)胞體外成熟及人胚胎玻璃化冷凍進(jìn)行了研究： 1.探討了不同大小水牛卵泡卯母細(xì)胞體外成熟過程中的減數(shù)分裂進(jìn)程及其胚胎發(fā)育潛能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同大小水牛卵泡卵母細(xì)胞成熟速度存在明顯差異，卵泡的體積越大，卵母細(xì)胞的體外成熟速度越快；2～6mm卵泡卵母細(xì)胞體外成熟后具有較高的胚胎發(fā)育潛能。 2.探討了表皮生長因子(EGF)濃度(0，10ng/ml，25ng/ml，50ng/ml，100ng/ml)對水牛卵母細(xì)

2、胞體外成熟的影響。EGF對水牛卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展沒有影響，但不同濃度的EGF均顯著提高水牛卵母細(xì)胞的第一極體(PB1)排出率和孤雌激活后的囊胚孵化率，其中以25n咖l的EGF效果最好。 3.探討了MEM維生素的濃度(0，0.2％，0.5％，1％，1.5％)對水牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響。添加0.2％和0.5％的MEM維生素對水牛卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展沒有影響，但顯著提高卵母細(xì)胞孤雌激活后的囊胚發(fā)育率、囊胚孵化率和囊胚細(xì)胞數(shù)；然而，當(dāng)濃度升高到

3、1.0％或1.5％時，明顯抑制卵丘的擴(kuò)展和降低PB1的排出率。 4.研究了人絨毛膜促性腺激素(HCG)濃度(0.75 IU/ml，2.5 IU/ml，5 IU/ml，7.5IU/ml)對水牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響。HCG顯著促進(jìn)水牛卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展和PB1的排出，但對水牛卵細(xì)胞孤雌激活后的胚胎及囊胚細(xì)胞數(shù)沒有影響。 5.探討了水牛和人無卵丘卵母細(xì)胞體外成熟的可行性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，未擴(kuò)展卯丘細(xì)胞包圍法和擴(kuò)展卵丘細(xì)胞團(tuán)支撐法可促進(jìn)

4、卵丘細(xì)胞與卯母細(xì)胞間的間隙連接重建，進(jìn)而促進(jìn)無卯丘水牛卵母細(xì)胞的體外成熟；與單層卯丘細(xì)胞共培養(yǎng)并不能促進(jìn)無卵丘水牛卵母細(xì)胞的體外成熟；卵巢組織包圍培養(yǎng)不能模擬體內(nèi)卵巢的環(huán)境，且卵巢組織可能分泌抑制卯母細(xì)胞胞質(zhì)成熟的因子；擴(kuò)展卵丘細(xì)胞團(tuán)支撐法能明顯促進(jìn)人無卵丘卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的恢復(fù)，其成熟培養(yǎng)的無卵丘人卵母細(xì)胞顯微受精后能發(fā)育成為正常囊胚:卵泡液有利于人卵丘細(xì)胞團(tuán)三維結(jié)構(gòu)的維持。 6.探討了玻璃化冷凍保存人4-8細(xì)胞胚胎的可行性及

5、其臨床應(yīng)用價值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胚胎承載器具和冷凍樣品體積對人4-8細(xì)胞胚胎的玻璃化冷凍保存效果有顯著影響，冷凍樣品的體積越小，其胚胎冷凍保存的效果越好，玻璃毛細(xì)管(GMP)的玻璃化冷凍保存效果優(yōu)于拉細(xì)開口塑料細(xì)管，是一種可用于臨床的人4-8細(xì)胞胚胎高效冷凍方法。 7.探討了胚胎培養(yǎng)結(jié)合玻璃化冷凍技術(shù)挽救人低評分胚胎的可行性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，第三天(D3)早期低評分胚胎不宜進(jìn)行冷凍保存，但經(jīng)過體外培養(yǎng)后部分胚胎能夠形成囊胚，且這些囊胚可以玻