小鼠卵母細胞玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究.pdf

1、本文選用5-6周齡雌性昆明小鼠的未成熟和成熟卵母細胞，將其在不同冷凍前處理液中平衡5min，然后在冷凍溶液中平衡30s后進行OPS法和SSV法玻璃化冷凍保存，觀察解凍后培養(yǎng)的卵母細胞的體外發(fā)育率，以期對兩種玻璃化冷凍保存技術(shù)進行比較研究。試驗結(jié)果如下： 小鼠未成熟卵母細胞的OPS法冷凍保存中，用EFS冷凍的卵母細胞解凍后形態(tài)正常率最高為84.4％，成熟率低于16.7％；在EDFS30中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為90.5％，

2、成熟率為22.5％；在EDFS40中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為91.9％，成熟率為40.5％，與對照組(96.4％和77.0％)差異極顯著(p＜0.01)。 小鼠未成熟卵母細胞的SSV法冷凍保存中，用EFS冷凍的卵母細胞解凍后形態(tài)正常率最高為86.0％，成熟率為46.5％；在EDFS30中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為92.3％，成熟率為57.2％；在EDFS40中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為90.1％，成熟率為48

3、.4％，與對照組(96.4％和77.0％)差異極顯著(p＜0.01)。 小鼠成熟卵母細胞的OPS法冷凍保存中，用EFS冷凍的卵母細胞解凍后形態(tài)正常率最高為75.8％，激活后卵裂率為47.8％；在EDFS30中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為87.2％，卵裂率為62.0％；在EDFS40中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為86.6％，卵裂率為57.4％，與對照組(99.0％和80.5％)差異極顯著(p＜0.01)。 小鼠成熟

4、卵母細胞的SSV法冷凍保存中，用EFS冷凍的卵母細胞解凍后形態(tài)正常率最高為82.7％，卵裂率為47.1％；在EDFS30中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為91.5％，卵裂率為57.5％；在EDFS40中冷凍保存，解凍后形態(tài)正常率最高為85.1％，卵裂率為55.9％，與對照組(99.0％和80.5％)差異極顯著(p＜0.01)。 EG和DMSO組合的EDFS玻璃化冷凍液對小鼠的未成熟卵母細胞和成熟卵母細胞冷凍后的形態(tài)正常率最高分別

5、為92.8％和90.7％，與對照組間差異不顯著(p＞0.01)。以上試驗中，無論是未成熟卵母細胞還是成熟卵母細胞，解凍后的發(fā)育潛力都表明EDFS冷凍液冷凍保存的效果好于EFS。 OPS法和SSV法冷凍小鼠未成熟卵母細胞的凍后形態(tài)正常率為91.6％和91.4％，與對照組間差異較顯著(p＞0.01)；成熟率為42.9％和59.1％，與對照組差異極顯著(p＜0.01)。OPS法和SSV法冷凍小鼠成熟卵母細胞的凍后形態(tài)正常率為86.5％