紅景天多糖對豬MII期卵母細胞體外成熟及玻璃化冷凍的影響.pdf

1、本試驗以屠宰場豬卵巢作為材料,主要研究紅景天多糖(RSP)對豬卵母細胞體外成熟及玻璃化冷凍保存的影響,旨在優(yōu)化豬卵母細胞體外成熟培養(yǎng)體系以及玻璃化冷凍方法,
　　結(jié)果表明:
　　(1)首先按照卵泡大小將卵母細胞分為4個組別:>6 mm、2-6 mm和<2 mm組。從直徑2-6 mm卵泡中抽取的卵母細胞體外培養(yǎng)核成熟率(83.90±1.54％)和大卵泡(直徑>6 mm)組(80.90±2.69%)無顯著差異(P>0.05),但

2、是都顯著高于小卵泡(直徑<2 mm)的核成熟率(47.03±4.72%,P<0.05)。
　　(2)比較不同體積成熟培養(yǎng)液對豬卵母細胞體外成熟效果的影響。于微滴(50μL)、250μL和500μL TCM199培養(yǎng)液中分別置15、35、65個豬卵母細胞進行體外成熟培養(yǎng),觀察核成熟情況,結(jié)果表明:250μL組的核成熟率(79.53±3.48%)與500μL組(79.71±5.91%)之間差異不顯著(P>0.05),但是均顯著過于微滴

3、(50μL)組(65.41±6.28%,P<0.05)。
　　(3)紅景天多糖(RSP)對豬卵母細胞體外成熟及發(fā)育潛力的影響。與對照組(83.50±1.00%)相比,添加0.6、6和60 mg·L-1的RSP均能提高其核成熟率,但差異不顯著(P>0.05);6和60 mg·L-1的RSP組能顯著提高卵母細胞內(nèi)GSH含量(P<0.05),隨著RSP濃度的增加可以降低ROS水平,但是各組之間差異不顯著(P>0.05);孤雌激活中,60

4、 mg·L-1 RSP組的卵裂率(88.44±5.06%)和6 mg·L-1 RSP的囊胚率(40.94±8.23%)最高,且顯著高于對照組(72.16±7.38%和24.06±5.16%,P<0.05);與對照組(33.52±4.05%)相比,0.6、6和60 mg·L-1 RSP組體外受精卵裂率均顯著提高(P<0.05),60 mg·L-1 RSP組的囊胚率達(19.20±3.13%),顯著高于對照組的(9.60±0.65%,P<0

5、.05)。
　　(4)本試驗分別采用自制半麥管、OPS及麥管作為冷凍載體,用于豬MII期卵母細胞冷凍保存,比較冷凍效果,結(jié)果顯示:半麥管法冷凍-解凍后卵母細胞形態(tài)正常率及存活率(87.36±1.93%,73.78±4.06%)稍高于 OPS法(84.37±3.49%,70.48±1.06%),兩者之間差異不顯著(P>0.05),但是顯著高于麥管法(67.43±2.72%,54.40±3.80,P<0.05),表明采用自制半麥管作為

6、冷凍載體冷凍豬卵母細胞具有較好的冷凍效果。
　　(5)為了提高豬成熟卵母細胞玻璃化冷凍效果,本試驗應(yīng)用玻璃化快速冷凍儀(Vit-Master)裝置進行豬成熟卵母細胞的冷凍,以觀察其冷凍效果。結(jié)果顯示:漿狀液氮降溫速率(21345±1768℃/min)遠遠高于普通液氮降溫速率(11982±1936℃/min);各組凍后形態(tài)完整率無顯著差異(P>0.05);在凍后存活率上,使用玻璃化快速冷東儀的不同濃度保護劑組(A’(57.87±10

7、.66%)、B’(76.5±10.33%)、C’(79.07±14.90%)和D’(81.94±6.98%))均分別高于對應(yīng)的不使用玻璃化快速冷凍儀組(A(49.73±2.91%)、B(60.63±12.45%)、C(71.33±14.38%)和D(78.50±7.40%)),但均無顯著差異(P>0.05),B’和C’組均高于C和D組,但差異不顯著(P>0.05),A和A’組均顯著低于B’、 C’和D’組(P<0.05)。因此,通過使用

8、Vi t–Master冷凍裝置提高冷凍速率,可以降低冷凍保護劑使用濃度并提高凍后存活率。
　　(6)紅景天多糖(RSP)對豬MII期卵母細胞玻璃化冷凍的影響。在豬卵母細胞成熟液中添加不同濃度RSP并將成熟培養(yǎng)44 h后的卵母細胞進行玻璃化冷凍,與對照組(72.44±2.64%,4.33±1.11%)相比,0.6、6、60 mg·L-1 RSP組解凍后卵母細胞成活率和孤雌激活卵裂率均有所提高,添加60 mg·L-1 RSP組孤雌激活