馬體細(xì)胞與牛卵母細(xì)胞和綿羊卵母細(xì)胞異質(zhì)克隆胚的構(gòu)建及其發(fā)育能力的比較.pdf

1、本試驗(yàn)用不同的方法體外培養(yǎng)馬皮膚成纖維細(xì)胞，以其作為核供體構(gòu)建了馬體細(xì)胞一綿羊卵母細(xì)胞和馬體細(xì)胞一牛卵母細(xì)胞兩種重組胚，并對其早期發(fā)育進(jìn)行了研究。 馬皮膚成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)：在37℃、5％CO<,2>、飽和濕度下，10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液適宜于馬皮膚成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)，小組織塊直接培養(yǎng)法比酶消化法更易獲得馬皮膚成纖維細(xì)胞，經(jīng)4次消化傳代培養(yǎng)后，分離純化了馬皮膚成纖維細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)至少傳至第10代時(shí)有76.3％的染色體

2、還保持正常的二倍體倍性(2n=64)。 綿羊卵母細(xì)胞孤雌激活：綿羊卵母細(xì)胞在用離子霉素聯(lián)合6-DMAP的化學(xué)激活時(shí)，其卵裂率為81.68％，囊胚發(fā)育率為34.43％，優(yōu)于在激活電壓1300v/cm，脈沖時(shí)間為10μsec，脈沖次數(shù)為2次，間隔0.5s的條件下，卵裂率為74.22％，囊胚率為29.69％的電激活效果。 經(jīng)盲吸去核，帶下注射結(jié)合電融合構(gòu)建重組胚。兩種重組胚在1580v/cm融合電壓下，融合率和卵裂率最高：馬-