高血糖對卵母細(xì)胞、二細(xì)胞胚凋亡的影響.pdf

1、背景與目的：妊娠合并糖尿病發(fā)生率可達5%-20%，未及時診斷和治療達標(biāo)的妊娠合并糖尿病可引起巨大兒、胎兒畸形等并發(fā)癥，并使流產(chǎn)、先兆子癇等發(fā)病率及母嬰圍生期死亡率增加，妊娠合并糖尿病患者自發(fā)性流產(chǎn)、胎兒重要器官先天性畸形發(fā)生率高達6%-10%。研究表明高血糖誘導(dǎo)的胚胎細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致胎兒畸形和流產(chǎn)的主要機制之一。
　　 然而以往對高糖誘導(dǎo)胚胎凋亡的研究卻局限于著床后胚胎和囊胚期。目前母體高血糖對卵母細(xì)胞和早期胚胎細(xì)胞凋亡的影響和機

2、制尚未清楚。本研究擬構(gòu)建STZ 誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型，檢測卵母細(xì)胞、二細(xì)胞胚凋亡率和線粒體凋亡通路Bax、caspase-3 表達水平，探討母體高血糖對卵母細(xì)胞、二細(xì)胞胚胎凋亡的影響及其可能激活的Bax-caspase-3 凋亡路徑。
　　 材料與方法：小鼠分為STZ 誘導(dǎo)糖尿病組和非糖尿病組。超排卵取卵和二細(xì)胞胚。采用免疫熒光法檢測卵母細(xì)胞和二細(xì)胞胚胎中Bax和caspase-3 蛋白的表達；實時定量RT-PCR檢測卵母細(xì)胞和二

3、細(xì)胞胚胎中Bax和caspase-3 mRNA的表達；Annexin-V染色法檢測卵母細(xì)胞和二細(xì)胞胚細(xì)胞凋亡；HE染色切片觀察高血糖對卵巢內(nèi)卵泡發(fā)育成熟的影響；電鏡下觀察高糖環(huán)境下二細(xì)胞胚超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果：糖尿病組Annexin-V陽性（凋亡）卵母細(xì)胞明顯多于非糖尿病組（P<0.001 ）。免疫熒光和實時定量RT-PCR 結(jié)果顯示：糖尿病組卵母細(xì)胞中Bax和caspase-3 蛋白和mRNA 表達水平均高于非糖尿病組（

4、P<0.05 ）。HE染色切片結(jié)果顯示：高血糖使卵泡生長延遲，生長期卵泡數(shù)量減少（P<0.05 ），且體積減小。在二細(xì)胞胚方面，無論在糖尿病組還是非糖尿病組，均未檢測到Annexin-V陽性二細(xì)胞胚細(xì)胞。Bax 蛋白和mRNA 表達在糖尿病組二細(xì)胞胚中明顯高于非糖尿病組（P<0.05 ），caspase-3 蛋白和mRNA 在兩組中的表達則無差異（P>0.05 ）。電鏡觀察顯示糖尿病組二細(xì)胞胚中可見大量明顯腫脹線粒體。
　　 結(jié)