EGCG對(duì)山羊卵母細(xì)胞IVM，IVF的影響以及BMP15基因在山羊卵母細(xì)胞成熟過(guò)程的表達(dá).pdf

1、卵母細(xì)胞或胚胎的體外培養(yǎng)時(shí)，比體內(nèi)的抗氧化劑水平低，因此卵母細(xì)胞或胚胎離開(kāi)供體后不能得到母體抗氧化劑的保護(hù)。這也是制約體外培養(yǎng)效果的一個(gè)因素。本研究通過(guò)體外培養(yǎng)時(shí)添加抗氧化劑以提高體外培養(yǎng)的效果。EGCG是茶葉中的一種主要抗氧化物質(zhì)，它是天然的抗氧化劑，且無(wú)毒副作用。本實(shí)驗(yàn)以山羊?yàn)閯?dòng)物模型采用TCM-199基礎(chǔ)培養(yǎng)體系，通過(guò)添加不同濃度的EGCG來(lái)研究其對(duì)由羊卵母細(xì)胞體外成熟，受精的影響。主要的研究結(jié)果如下：首先，在TCM-199基礎(chǔ)培

2、養(yǎng)液中添加0、10、15、20和25μM不同濃度的EGCG，并分析結(jié)果。發(fā)現(xiàn)當(dāng)添加EGCG濃度為15μM時(shí)對(duì)山羊卵母細(xì)胞的成熟有明顯的促進(jìn)作用，且差異顯著(p<0.05)。其次，在山羊卵母細(xì)胞成熟階段中添加EGCG濃度為15μM對(duì)后期成熟細(xì)胞受精也有明顯的促進(jìn)作用，且差異顯著。 BMP15是卵母細(xì)胞分泌因子重要成員之一，其在卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中發(fā)揮重要作用。目前，有關(guān)BMP15的研究主要集中于人、綿羊、奶山羊、牛、豬等

3、，而在山羊中對(duì)于BMP15的研究主要限于多胎性方面的研究，尚未見(jiàn)有關(guān)山羊BMP15基因在山羊卵母細(xì)胞不同成熟階段表達(dá)的相關(guān)研究報(bào)道。因此，本文欲通過(guò)對(duì)山羊BMP15基因在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的表達(dá)研究，探討B(tài)MP15在山羊生殖系統(tǒng)中所發(fā)揮的作用。 根據(jù)從NCBI上查閱山羊的BMP15基因序列來(lái)設(shè)計(jì)引物，以其PCR產(chǎn)物作為內(nèi)標(biāo)，分別以山羊各個(gè)階段卵母細(xì)胞反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)了BMP15mRNA在山羊卵母細(xì)胞成

4、熟發(fā)育的不同階段的表達(dá)情況，通過(guò)熒光PCR檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)BMP15在山羊卵母細(xì)胞成熟發(fā)育的不同階段中有不同的表最。發(fā)現(xiàn)該基因在未成熟卵母細(xì)胞中表達(dá)水平較低，在培養(yǎng)12h其表達(dá)豐度達(dá)到峰值，并與卵丘擴(kuò)展時(shí)間相一致，隨后下降，推測(cè)BMP15可能在山羊卵丘細(xì)胞擴(kuò)展中發(fā)揮重要作用。從而驗(yàn)證了BMP15山羊在卵母細(xì)胞成熟發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。 采用免疫組化技術(shù)測(cè)定BMP15蛋白在性腺中的定位，結(jié)果顯示：BMP15在山羊卵巢初級(jí)卵泡、次級(jí)