豬卵母細(xì)胞體外成熟前后基因差異表達(dá)的初步研究.pdf

1、當(dāng)今，卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)技術(shù)雖然取得了很大的進(jìn)展，但是體外成熟卵母細(xì)胞的質(zhì)量還是不如體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞，其質(zhì)量直接影響著體外受精、核移植、轉(zhuǎn)基因等現(xiàn)代胚胎生物工程的進(jìn)展。在卵母細(xì)胞上成熟調(diào)控機(jī)制還處于研究階段，尤其是在分子層面上的成熟機(jī)制還不是很清楚。本研究運(yùn)用mRNA差異顯示技術(shù)(differential display reverse transcription polymerase chain reaction，DDRT-PCR

2、)對(duì)豬的卵母細(xì)胞體外成熟前后差異表達(dá)的基因進(jìn)行初步研究，以便更清晰地了解豬卵母細(xì)胞成熟的分子機(jī)制，為豬卵母細(xì)胞體外成熟制定更完善的培養(yǎng)體系。
　　 本研究以3條錨定引物和3條隨機(jī)引物，對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟前后差異表達(dá)的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染后，從凝膠回收得到了20條差異表達(dá)條帶，其中14條在第二次PCR擴(kuò)增反應(yīng)中得到重?cái)U(kuò)增，12條重?cái)U(kuò)增后的條帶得到成功克隆，7條克隆成功的條帶測(cè)序成功。經(jīng)BLAST軟

3、件在GenBank中比對(duì)，發(fā)現(xiàn)差異條帶11、12和SH3GLBl（SH3-domain GRB2-1ike endophilin Bl）基因具有較高的同源性，預(yù)測(cè)其功能是維持卵母細(xì)胞內(nèi)線粒體的正常形態(tài)，抑制線粒體途徑的細(xì)胞凋亡；差異條帶15和LGALS3(lectin galactoside-bindingsoluble3)基因具有較高的同源性，LGALS3為抗凋亡基因；差異條帶16、17和PHF13(finger protein13)

4、基因具有較高的同源性，其功能與卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)控有關(guān)；差異條帶19和AVEN(Cell death regulator Aven)基因具有較高的同源性，AVEN為抗凋亡基因。標(biāo)號(hào)為19的差異基因（與AVEN基因具有較高的同源性）在卵母細(xì)胞成熟前表達(dá)，成熟后消失；標(biāo)號(hào)為11和12的差異基因（與SH3GLB1基因具有較高的同源性）、標(biāo)號(hào)為15的差異基因（與LGALS3基因具有較高的同源性）、標(biāo)號(hào)為16和17的