I-R腦損傷發(fā)生機制及白藜蘆醇苷保護作用.pdf

1、第一部分大鼠I/R腦損傷模型的建立及其發(fā)病機制 目的：建立一種簡單可靠、創(chuàng)傷較小的大鼠局灶性I/R腦損傷模型，在不同的觀察時間點測定腦組織NF-κBP65、Bcl-2與Bax蛋白的表達水平及神經細胞凋亡發(fā)生的數目，探討NF-κB在I/R腦損傷中對神經細胞凋亡的影響及機制。 方法：40只雄性SD大鼠隨機分為模型組、假手術對照組。模型組采用改良線栓法建立局灶性I/R腦損傷模型，在缺血2h后，按再灌注時間分為四個亞組，即再灌注

2、2h，6h，24h和48h。假手術對照組不造成缺血，按術后處死動物的不同時間分為2h，6h，24h和48h四個亞組。對各組大鼠進行病理組織學檢查，并用TUNEL法測定神經細胞凋亡情況，免疫組化法檢測NF-κBP65、Bcl-2、Bax蛋白的表達。 結果：①與假手術對照組比較，模型組在再灌注2h有梗塞灶形成，與周圍組織分界清楚，隨著再灌注時間延長，梗塞灶范圍擴大；②模型組在再灌注2h，部分神經細胞己經開始發(fā)生凋亡，隨著再灌注時間的

3、延長，凋亡細胞數逐漸增多，24h達高峰，以后逐漸減少，而且凋亡細胞主要位于梗塞灶邊緣，梗塞灶中心區(qū)偶見凋亡細胞。各觀察時間點凋亡細胞數量與假手術對照組比較均呈顯著增加(P<0.05)；③模型組在再灌注2h，缺血梗死區(qū)周圍就可見Bcl-2和Bax在神經細胞內表達，各觀察時間點Bcl-2和Bax蛋白表達均明顯高于假手術對照組(P<0.05)；④模型組Bcl-2蛋白在觀察早期(再灌注2h至6h)表達明顯增高，Bcl-2/Bax比值相應增高，6

4、h達到峰值，而Bax蛋白的表達從再灌注2h至24h逐漸增高，24h達到最高峰，此時Bcl-2/Bax比值出現明顯降低，Bcl-2/Bax比值與凋亡之間存在較強的負相關關系(P<0.05)；⑤與假手術對照組比較，模型組在再灌注2h就可觀察到NF-κBP65在梗塞灶邊緣的神經細胞內有較多表達，且表達量隨再灌注時間延長而明顯增加，高峰出現在再灌注24h，48h出現降低趨勢，24～48h NF-κBP65從細胞漿明顯向細胞核移位。各觀察時間點N

5、F-κBP65的表達與假手術對照組比較均呈顯著增加(P<0.05)，NF-κB65與Bcl-2/Bax比值之間存在較強的負相關關系(P<0.05)。 結論：采用線栓法能較好地模擬局灶性I/R腦損傷的病理生理過程，此方法操作簡單、易行、結果穩(wěn)定。在局灶性I/R腦損傷的遲發(fā)性損傷階段，細胞凋亡是神經元死亡的主要方式。蛋白Bcl-2、Bax對凋亡的發(fā)生起著重要的調節(jié)作用。早期以Bcl-2的抗凋亡反應為主，晚期以Bax的促凋亡反應占優(yōu)，

6、二者作用相拮抗。NF-κB的活化促進了神經細胞凋亡的發(fā)生，機制可能在于上調促凋亡蛋白Bax表達，拮抗Bcl-2的抗凋亡作用。 第二部分白藜蘆醇苷對大鼠I/R腦損傷的保護作用 目的：觀察PD對I/R腦損傷后神經細胞凋亡、腦組織NF-κBP65、Bcl-2、Bax蛋白表達的影響，進一步探討PD保護作用的可能機制，為PD應用于腦復蘇提供更充分的理論依據。 方法：60只雄性SD大鼠隨機分為模型組、地塞米松組(以下簡稱地米

7、組)、PD組，各組均采用改良線栓法建立局灶性I/R腦損傷模型。每組又分別按再灌注時間分為4個亞組，即缺血2h后分別再灌注2h、6h、24h、48h，地米組及PD組在缺血前30min及再灌注同時，分別腹腔注射地塞米松注射液(20mg/kg)、0.5％PD(30mg/kg)。對各組大鼠進行病理組織學檢查，并用TUNEL法測定神經細胞凋亡情況，免疫組化法檢測NF-κBP65、Bcl-2、Bax蛋白的表達。 結果：①與模型組相比較，地米

8、組及PD組的腦組織損傷程度明顯減輕，腦組織間隙的空泡較少，并且出現核邊集、固縮的神經元也遠較模型組少，PD組病理改變的減輕更為明顯；②免疫組化結果表明治療組在各個觀察時間點NF-κBP65表達較模型組均呈顯著減少(P<0.05)，兩治療組之間比較并無顯著差異(P>0.05)；③Bax在治療組亦隨著再灌注時間的延長而表達輕度增強，在24h達到高峰，但在各個觀察時間點Bax表達較模型組均明顯下調(P<0.05)；④Bcl-2在模型組再灌注2

9、h即有表達，6h達至高峰，之后隨著再灌注時間的延長而明顯減少，而治療組Bcl-2的表達在各個觀察時間點較模型組均明顯上調(P<0.05)，兩治療組之間，在各個觀察時間點Bcl-2、Bax表達并無顯著差異(P>0.05)；⑤與模型組相比較，治療組在各觀察時間點Bcl-2/Bax比值均明顯升高(P<0.05)，兩治療組之間Bcl-2/Bax比值除在再灌注2h比較無顯著差異(P>0.05)外，在再灌注6h、24h、48hPD組均高于地米組，有