白藜蘆醇對(duì)腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及研究機(jī)制.pdf

1、在內(nèi)臟器官中，腸組織是對(duì)缺血性損傷最為敏感的器官。研究表明，嚴(yán)重創(chuàng)傷、大面積燒傷、休克、重癥胰腺炎等應(yīng)激狀態(tài)均存在不同程度腸缺血再灌注損傷（Ischemia-reperfusioninjury；I/RI）。隨著近年來研究的深入，腸道被認(rèn)為是誘發(fā)多器官功能障礙綜合征（MultipleOrganDysfunctionSyndrome,MODS）的始動(dòng)器官。腸缺血再灌注損傷后，不僅可以引起腸組織的局部損害，而且可以導(dǎo)致細(xì)菌和毒素移位到體循環(huán)，

2、引起網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)發(fā)生系列反應(yīng)，促炎癥細(xì)胞因子大量釋放入血，并進(jìn)一步在循環(huán)系統(tǒng)彌散，導(dǎo)致毒血癥、休克等，繼而損害肝、肺、腎等多個(gè)器官，最終導(dǎo)致患者死亡。因此，對(duì)腸缺血再灌注損傷的分子機(jī)制和治療方法的研究成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的熱點(diǎn)課題。白藜蘆醇（resveratrol，Res），化學(xué)名稱為3，5，4’-三羥基苯二烯，其是一種非黃酮類多酚化合物，在自然界主要以苷形式存在。Res于1940年由日本學(xué)者首次從毛葉藜蘆（Veratrumgrandiflo

3、rum）的根部分離獲得。迄今為止的研究表明，Res存在于32個(gè)不同種屬的70余種不同植物當(dāng)中。在虎杖和何首烏的根莖、葡萄皮和葡萄核、藜蘆的根、莖、葉和花生的根、莖、花中含量較高。在新鮮的葡萄皮中含量最高，約為50～100mg/kg。在Res被發(fā)現(xiàn)后的幾十年時(shí)間里，Res并不被研究者所重視，其研究并未取得顯著進(jìn)展。直至1992年，Res被證實(shí)是紅酒的主要成份之一，并被用來解釋“法國(guó)矛盾”這一現(xiàn)象。此后，對(duì)于Res藥理作用的研究迅速增加，發(fā)

4、現(xiàn)其具有：植物雌激素作用、抗腫瘤、抗炎、心血管保護(hù)、增強(qiáng)胰島素敏感性、自由基清除和抗衰老等多種生物學(xué)活性。并于1999年由Ray等首次證實(shí)，Res具有抗缺血性損傷的作用。本研究應(yīng)用小鼠腸缺血再灌注模型，進(jìn)一步探討了Res預(yù)處理對(duì)小鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，觀察了Res在腸缺血再灌注損傷過程中對(duì)氧化應(yīng)激的影響，并從蛋白、基因水平研究了Res與腸缺血再灌注損傷發(fā)生密切相關(guān)的NO信號(hào)通路相關(guān)分子的關(guān)系。旨在進(jìn)一步探討Res對(duì)腸缺血再灌注損

5、傷的保護(hù)作用機(jī)制，為Res的臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。
　　一、Res對(duì)小鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及對(duì)氧化應(yīng)激的影響
　　目的：證實(shí)Res對(duì)小鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，進(jìn)一步探討其與腸缺血再灌注損傷過程中氧化應(yīng)激的關(guān)系。方法：選用健康雄性Balb/c小鼠，隨機(jī)分為分別為假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組和Res預(yù)處理組。腸缺血1h，再灌注24h。再灌注結(jié)束時(shí)腸組織切片行HE染色，光鏡觀察腸組織損傷情況。并對(duì)各組腸組織谷胱甘肽和丙

6、二醛水平，髓過氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果統(tǒng)學(xué)分析。結(jié)果：Res組同缺血再灌注損傷組相比，腸組織損傷明顯減輕，Park/Chiu評(píng)分顯著降低。Res明顯降低了髓過氧化物酶活性和丙二醛水平，而增加了谷胱甘肽的水平和超氧化物歧化酶的活性。結(jié)論：Res預(yù)處理能夠有效的緩解腸缺血再灌注損傷后腸組織的損傷程度，降低多形核白細(xì)胞的激活和浸潤(rùn)，減輕損傷組織脂質(zhì)過氧化損傷。其有可能是通過抗氧化、自由基清除發(fā)揮腸缺血的保護(hù)作用。
　

7、　二、Res預(yù)處理發(fā)揮腸缺血再灌注損傷保護(hù)作用的可能機(jī)制
　　目的：在證實(shí)Res對(duì)小鼠腸缺血再灌注損傷保護(hù)作用的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討其與NO信號(hào)通路相關(guān)分析表達(dá)及活性變化的關(guān)系，探索其發(fā)揮保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法：選用健康雄性Balb/c小鼠，隨機(jī)分為分別為假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組和Res預(yù)處理組。腸缺血1h，再灌注24h。檢測(cè)腸組織損傷后NO的水平和總的NOS的活性；提取腸組織總蛋白和總RNA，采用WesternBlot和實(shí)時(shí)定

8、量PCR技術(shù)分別從蛋白和基因水平檢測(cè)iNOS和eNOS的表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光染色和激光共聚焦方法觀察NF-κB核轉(zhuǎn)位情況；此外，對(duì)調(diào)控NF-κB的SIRT1表達(dá)和IκB磷酸化進(jìn)行觀察。結(jié)果：與對(duì)缺血再灌注損傷組相比，Res處理組腸組織NO水平和NOS活性明顯升高；eNOS蛋白和基因的表達(dá)明顯上升，而iNOS蛋白和基因的表達(dá)顯著下降。此外，Res明顯的抑制了損傷后NF-κB核轉(zhuǎn)位。對(duì)影響NF-κB核轉(zhuǎn)位的調(diào)控分子SIRT1和IκB的研究發(fā)現(xiàn)