無標記核酸探針的構建及其在高靈敏核酸檢測中的應用.pdf

1、核酸探針作為現代研究生命科學的一種基本檢測工具，與一般的檢測方法相比，具有高靈敏度、強穩(wěn)定性、高特異性、易于合成、設計簡單等優(yōu)點?？蒲泄ぷ髡咴谝呀浹邪l(fā)出的核酸探針基礎上，不斷開發(fā)出一系列新型核酸探針及其檢測方法，并廣泛應用到生物學、化學、醫(yī)學診斷以及疾病檢測等多個領域?；诖耍菊撐幕谘h(huán)鏈置換擴增技術和核酸外切酶Ⅰ，構建了新型無標記核酸探針，并應用于核酸的高靈敏檢測，具體開展了以下三個方面的工作:
　　1、發(fā)展了一種基于聚合酶

2、鏈置換循環(huán)擴增的無標記長尾核酸探針體系。在此體系中，核酸探針既可以作為靶分子的識別探針又可以是聚合酶的反應模板，并且結合具有鏈置換活性的聚合酶，設計簡單、操作簡便，成本低。并且，該體系中無需直接擴增目標分子，在等溫條件下實現循環(huán)聚合反應，不容易發(fā)生由于外源性污染導致的假陽性反應，可以對核酸進行定量檢測分析。
　　2、發(fā)展了一種基于新型核酸探針介導信號放大方法用于高靈敏檢測核酸。新型長尾核酸探針的長尾在引物退火延伸過程中延能長雙鏈D

3、NA產物，嵌入更多的SG熒光染料分子，釋放出強的熒光信號，與循環(huán)擴增反應相結合，提高核酸檢測的靈敏度，檢測下限達到50aM。與分子信標探針檢測方法相比，該方法的優(yōu)勢在于不用標記，且長尾探針介導的產物能使檢測信號放大，進一步提高核酸檢測的靈敏度。
　　3、發(fā)展了一種基于核酸外切酶Ⅰ的新型核酸探針用于超靈敏檢測DNA或miRNA。核酸外切酶Ⅰ能特異性從3'→5'切割DNA單鏈，當沒有靶分子存在時，其能效地從3'-OH端降解探針和引物，