高靈敏核酸擴增技術在生物傳感中的應用.pdf

1、小分子-蛋白質(zhì)的相互作用、拷貝數(shù)變異與人類生產(chǎn)生活密切相關,因而一直是重要的分析研究對象。蛋白質(zhì)是生物化學與生命科學中重要的生物大分子,是生物性狀的直接表達者,從整體上維持生物體新陳代謝活動的進行,擔負著各種生理功能,深入研究小分子物質(zhì)與蛋白質(zhì)的作用機理,對分子水平上闡明生命的奧秘等方面具有重要的意義。而基因拷貝數(shù)變異是研究基因組進化和表型差異的一個重要方面,被認為是個體之間在基因組序列差異上的一個重要原因。許多研究結(jié)果表明,拷貝數(shù)變異

2、可導致不同程度的基因表達差異,與正常表型的構(gòu)成及疾病的發(fā)生發(fā)展具有一定的聯(lián)系。因此,建立小分子-蛋白質(zhì)相互作用及拷貝數(shù)變異快速、簡便的分析方法具有重要的生物學意義。核酸擴增由于具有靈敏度高、特異性強、省時省力等諸多優(yōu)點而被廣泛應用于生物傳感器的研究。
　　 本文研究了幾種檢測小分子-蛋白質(zhì)相互作用以及拷貝數(shù)變異的核酸擴增檢測方法：⑴結(jié)合T7聚合酶與一個小分子標記的DNA雙鏈,發(fā)展了一種RNA轉(zhuǎn)錄器件。當小分子與其蛋白質(zhì)受體結(jié)合時

3、,該納米器件的RNA轉(zhuǎn)錄活性受到抑制,進而影響熒光信號的產(chǎn)生?；谶@種原理,我們發(fā)展了一種新型的均相無標記檢測策略用于檢測小分子及其蛋白質(zhì)受體的相互作用。實驗結(jié)果表明,該實驗方法對蛋白質(zhì)從0.5 nM至64nM有良好的動態(tài)響應,檢測下限為0.2 nM。此外,我們還使用了三種小分子化合物及其蛋白質(zhì)受體驗證了該實驗方法的通用檢測性能。⑵基于巢式多重實時熒光定量PCR系統(tǒng),使用α-珠蛋白基因作為模型系統(tǒng),對基因組序列的給定區(qū)域內(nèi)的拷貝數(shù)進行同