口腔黏膜癌變相關(guān)基因的表達(dá)驗(yàn)證和功能研究.pdf

1、目的：課題組在前期研究中建立了人口腔黏膜上皮細(xì)胞體外癌變細(xì)胞模型，包括永生化的HIOEC細(xì)胞和成瘤的HB細(xì)胞，為深入了解癌變的分子機(jī)制提供了理想的研究對象。接著采用寡核苷酸芯片和雙向電泳。質(zhì)譜分析方法檢測癌變模型各個(gè)階段細(xì)胞的基因和蛋白表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)大量差異表達(dá)的基因和蛋白。但是基因芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果存在一定的假陽性或假陰性，而且體外建立的細(xì)胞模型與體內(nèi)腫瘤形成過程存在一定的差別，因此有必要在細(xì)胞株和臨床組織標(biāo)本中驗(yàn)證差異基因的表達(dá)，

2、從中篩選癌變相關(guān)基因，為后續(xù)基因功能研究和應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。 方法：1、應(yīng)用Realtime PCR和Western blotting方法在口腔黏膜上皮細(xì)胞癌變模型和另5株口腔鱗癌細(xì)胞系中驗(yàn)證GDF15、ANXA1、ANXA2和CTSB等基因的mRNA和蛋白的表達(dá)。 2、應(yīng)用Realtime PCR和免疫組化方法在30例口腔鱗癌組織標(biāo)本和癌旁組織中驗(yàn)證GDF15、ANXA1、ANXA2和CTSB等基因的mRNA和蛋白的表

3、達(dá)，初步探討各基因的表達(dá)與煙酒暴露、腫瘤部位、大小、臨床分期、TNM分期、病理分級等臨床病理的關(guān)系。 3、分別應(yīng)用基因克隆DNA重組技術(shù)和小RNA干擾技術(shù)研究GDF15基因?qū)谇击[癌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期、克隆形成和裸鼠皮下成瘤能力等生物學(xué)行為的影響。 結(jié)果：1、GDF15基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細(xì)胞中表達(dá)高于永生化的HIOEC細(xì)胞。GDF15基因的mRNA和蛋白在口腔鱗癌組織標(biāo)本中高表達(dá)，且與腫瘤的分化程度相關(guān)。

4、成功構(gòu)建GDF15基因過表達(dá)質(zhì)粒，GDF15基因過表達(dá)對Tca8113細(xì)胞增殖和克隆形成無明顯影響。成功構(gòu)建GDF15基因小RNA干擾質(zhì)粒并建立干擾穩(wěn)定株，GDF15基因小RNA干擾能抑制Tca8113細(xì)胞的增殖，影響細(xì)胞周期、克隆形成和裸鼠體內(nèi)成瘤能力。 2、ANXA1基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細(xì)胞中表達(dá)低于永生化的HIOEC細(xì)胞。ANXA1基因的mRNA和蛋白在口腔鱗癌組織標(biāo)本中低表達(dá)，且與腫瘤的分化程度相關(guān)。

5、 3、ANXA2基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細(xì)胞中表達(dá)高于永生化的HIOEC細(xì)胞。ANXA2基因的蛋白在口腔鱗癌組織標(biāo)本中高表達(dá)。 4、CTSB基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細(xì)胞中表達(dá)高于永生化的HIOEC細(xì)胞。CTSB基因的mRNA和蛋白在口腔鱗癌組織標(biāo)本中高表達(dá)。 結(jié)論：1、GDF15、ANXA2和CTSB在口腔鱗癌癌變過程中表達(dá)增加，ANXA1在口腔鱗癌癌變過程中表達(dá)降低，驗(yàn)證了基因芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果。