口腔黏膜癌變相關(guān)基因的表達驗證和功能研究.pdf

1、目的：課題組在前期研究中建立了人口腔黏膜上皮細胞體外癌變細胞模型，包括永生化的HIOEC細胞和成瘤的HB細胞，為深入了解癌變的分子機制提供了理想的研究對象。接著采用寡核苷酸芯片和雙向電泳。質(zhì)譜分析方法檢測癌變模型各個階段細胞的基因和蛋白表達譜，發(fā)現(xiàn)大量差異表達的基因和蛋白。但是基因芯片和蛋白質(zhì)組學的結(jié)果存在一定的假陽性或假陰性，而且體外建立的細胞模型與體內(nèi)腫瘤形成過程存在一定的差別，因此有必要在細胞株和臨床組織標本中驗證差異基因的表達，

2、從中篩選癌變相關(guān)基因，為后續(xù)基因功能研究和應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。 方法：1、應(yīng)用Realtime PCR和Western blotting方法在口腔黏膜上皮細胞癌變模型和另5株口腔鱗癌細胞系中驗證GDF15、ANXA1、ANXA2和CTSB等基因的mRNA和蛋白的表達。 2、應(yīng)用Realtime PCR和免疫組化方法在30例口腔鱗癌組織標本和癌旁組織中驗證GDF15、ANXA1、ANXA2和CTSB等基因的mRNA和蛋白的表

3、達，初步探討各基因的表達與煙酒暴露、腫瘤部位、大小、臨床分期、TNM分期、病理分級等臨床病理的關(guān)系。 3、分別應(yīng)用基因克隆DNA重組技術(shù)和小RNA干擾技術(shù)研究GDF15基因?qū)谇击[癌細胞的增殖、細胞周期、克隆形成和裸鼠皮下成瘤能力等生物學行為的影響。 結(jié)果：1、GDF15基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細胞中表達高于永生化的HIOEC細胞。GDF15基因的mRNA和蛋白在口腔鱗癌組織標本中高表達，且與腫瘤的分化程度相關(guān)。

4、成功構(gòu)建GDF15基因過表達質(zhì)粒，GDF15基因過表達對Tca8113細胞增殖和克隆形成無明顯影響。成功構(gòu)建GDF15基因小RNA干擾質(zhì)粒并建立干擾穩(wěn)定株，GDF15基因小RNA干擾能抑制Tca8113細胞的增殖，影響細胞周期、克隆形成和裸鼠體內(nèi)成瘤能力。 2、ANXA1基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細胞中表達低于永生化的HIOEC細胞。ANXA1基因的mRNA和蛋白在口腔鱗癌組織標本中低表達，且與腫瘤的分化程度相關(guān)。

5、 3、ANXA2基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細胞中表達高于永生化的HIOEC細胞。ANXA2基因的蛋白在口腔鱗癌組織標本中高表達。 4、CTSB基因的mRNA和蛋白在成瘤的HB細胞中表達高于永生化的HIOEC細胞。CTSB基因的mRNA和蛋白在口腔鱗癌組織標本中高表達。 結(jié)論：1、GDF15、ANXA2和CTSB在口腔鱗癌癌變過程中表達增加，ANXA1在口腔鱗癌癌變過程中表達降低，驗證了基因芯片和蛋白質(zhì)組學的結(jié)果。