羊地方性鼻內(nèi)腺瘤細(xì)胞癌變相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度和轉(zhuǎn)錄水平的研究.pdf

1、地方性鼻內(nèi)腺瘤是一種慢性、進(jìn)行性、接觸性傳染病，潛伏期長，且一旦出現(xiàn)臨床癥狀，無一例外死亡，嚴(yán)重威脅羊的種群安全。目前對(duì)于區(qū)別陽性感染羊只還沒有比較成功的方法。本研究探討羊地方性鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基轉(zhuǎn)移酶和細(xì)胞癌變相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平和啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度，并研究基因甲基化程度對(duì)其轉(zhuǎn)錄水平的影響。運(yùn)用SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR和甲基化特異性PCR檢測(cè)20份正常鼻內(nèi)腺組織和24份鼻內(nèi)腺瘤組織中抑瘤基因P73、P53、GADD45

2、G、CHFR、THBS1、MGMT，轉(zhuǎn)錄因子CEBPA，原癌基因KRAS、NRAS、C-myc，甲基轉(zhuǎn)移酶基因DNMT3a、DNMT3b、DNMT1，以及與細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因EGFR的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平以及所選基因啟動(dòng)子的甲基化程度，并對(duì)甲基轉(zhuǎn)移酶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平對(duì)癌變相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的影響以及癌變相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化程度對(duì)該基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的影響進(jìn)行了研究分析，揭示ENTV致瘤后病變部位細(xì)胞癌變相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄與其啟動(dòng)子區(qū)

3、甲基化程度的關(guān)聯(lián)，并篩選出能用于腫瘤診斷的標(biāo)志物候選基因，并為闡明ENTV致瘤的表觀遺傳機(jī)制提供參考。研究結(jié)果如下:
　　1.基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化研究結(jié)果所選6個(gè)抑瘤基因中僅CHFR、GADD45G和THBS1檢測(cè)出甲基化，CHFR基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為58.2％，在正常鼻內(nèi)腺組織中基化陽性率為60％，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;THBS1基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為79.2％，在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測(cè)出甲基化，兩組間有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); GADD45G基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中完全甲基化率為58.5％，不完全甲基化率為25％，在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測(cè)出甲基化，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在原癌基因中僅C-myc基因檢測(cè)出甲基化，C-myc基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為54.2％，在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測(cè)出甲基化，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。轉(zhuǎn)錄因子CEBPA基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為79.2％，在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測(cè)出

5、甲基化，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為87.5％，在正常鼻內(nèi)腺組織中甲基化陽性率為75％，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甲基轉(zhuǎn)移酶基因中僅DNMT1和DNMT3b檢測(cè)出甲基化，DNMT1和DNMT3b在鼻內(nèi)腺瘤組織中的甲基化陽性率分別為20.8％、41.7％，在正常鼻內(nèi)腺組織中均未檢測(cè)出甲基化，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平研究結(jié)果選取DNMT1基因在正

6、常鼻內(nèi)腺組織中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)量作為對(duì)照，抑癌基因中GADD45G、THBS1基因存在異常轉(zhuǎn)錄表達(dá)，THBS1基因在20份正常鼻內(nèi)腺組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為0.38±0.25，在19份甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為1.05±0.32，在5份非甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中為1.03±0.21;GADD45G基因在20份正常鼻內(nèi)腺組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為0.47±0.72，在14份完全甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中為2.48±0.82，在6份不完全甲基化鼻

7、內(nèi)腺瘤組織中為1.42±0.33，在4份非甲基化得鼻內(nèi)腺瘤組織中為0.46±0.41。原癌基因中僅C-myc出現(xiàn)異常表達(dá)，在20份正常鼻內(nèi)腺組織中C-myc基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為-0.42±1.90，在13份甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為-1.37±0.58，在11份非甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為-0.98±0.21。轉(zhuǎn)錄因子CEBPA基因在20份正常鼻內(nèi)腺組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為0.85±0.24，在19份甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為-0.76±0

8、.26，在5份非甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為0.79±0.11;腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR在鼻內(nèi)腺瘤組織和正常鼻內(nèi)腺組織中都未見其表達(dá)。甲基化轉(zhuǎn)移酶基因中僅DNMT3b基因出現(xiàn)異常轉(zhuǎn)錄表達(dá)，在20份正常鼻內(nèi)腺組織中DNMT3b基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平分別為1.39±0.88，10份甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT3b為0.22±0.63，14份非甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中為1.41±0.71，兩者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。20例正常鼻內(nèi)腺組織中DNM

9、T1基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平分別為0.00±0.53、5例甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT1相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為-0.64±0.56，19例非甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT1為-0.32±0.61，兩者間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　綜合可知，原癌基因C-myc，轉(zhuǎn)錄因子CEBPA，抑癌基因GADD45G、THBS1和甲基轉(zhuǎn)移酶基因DNMT1和DNMT3b在鼻內(nèi)腺瘤組織中存在異常甲基化。甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b和原癌基因C-myc mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)上調(diào);

10、轉(zhuǎn)錄因子CEBPA轉(zhuǎn)錄表達(dá)上調(diào)，但在討論中可知與其他腫瘤研究結(jié)果不同;抑癌基因THBS1轉(zhuǎn)錄表達(dá)下調(diào);腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR存在甲基化，但未出現(xiàn)表達(dá)。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，表明鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT3b、THBS1、GADD45G和C-myc基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平與相對(duì)應(yīng)基因啟動(dòng)區(qū)的甲基化調(diào)控有一定關(guān)聯(lián);在甲基轉(zhuǎn)移酶基因中DNMT3b的表達(dá)上調(diào)可能與部分細(xì)胞癌變相關(guān)基因出現(xiàn)過度甲基化修飾有一定關(guān)聯(lián);腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR零表達(dá)可能與地方性鼻內(nèi)腺