SCA3-MJD患者外周血ATXN3基因啟動子區(qū)DNA甲基化水平的研究.pdf

1、目的:
　　研究脊髓小腦性共濟失調3型/馬查多-約瑟夫病(spinocerebellarataxia type3/Machado-Joseph disease，SCA3/MJD)患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中ATXN基因啟動子區(qū)DNA甲基化水平，研究ATXN3基因啟動子區(qū)DNA甲基化水平與CAG重復序列拷貝數、SCA3/MJD發(fā)病年齡及ATXN3基因mRN

2、A表達水平之間的相關性。
　　方法:
　　共收集71個SCA3/MJD家系的141例患者作為本研究的病例組和112例健康個體作為對照組。采用密度梯度離心分離SCA3/MJD患者和正常人的PBMCs;采用重亞硫酸鹽測序法(bisulfite genomicsequencing PCR，BSP)檢測ATXN3基因啟動子區(qū)2個CpG島的DNA甲基化水平;采用T載體克隆測序檢測SCA3/MJD患者ATXN3基因的CAG重復序列拷貝數

3、;采用實時熒光定量PCR(real-timequantitative PCR，qRT-PCR)方法檢測ATXN3 mRNA的表達水平。
　　結果:
　　1.通過BSP技術驗證了ATXN3基因啟動子區(qū)2個CpG島的甲基化水平，CpG島1（距離轉錄起始位點較遠）呈高甲基化水平，CpG島2（距離轉錄起始位點較近）呈低甲基化水平。
　　2.SCA3/MJD病例組ATXN3基因啟動子區(qū)CpG島1的甲基化水平較對照組明顯(82.6

4、1±3.97 vs78.97±2.22，p=0.00);所收集的71個SCA3/MJD家系中，有7個家系的同一親代有多個子代，且子代的CAG重復序列拷貝數相同，其中6個家系中發(fā)病年齡早的患者較發(fā)病年齡晚的甲基化水平偏高。
　　3.SCA3/MJD病例組中，有CAG重復序列動態(tài)突變家系中的親代較未出現(xiàn)動態(tài)突變家系親代，ATXN3基因啟動子區(qū)DNA甲基化水平偏高(86.04±2.68 vs80.04±2.8, p=0.00)。

5、　　4.SCA3/MJD病例組與對照組的ATXN3基因mRNA水平無明顯差異(0.51±0.25 vs0.46±0.19，p=0.27)，mRNA水平與ATXN3基因啟動子區(qū)DNA甲基化水平無相關性。
　　結論:
　　1.首次利用BSP技術驗證了ATXN3基因啟動子區(qū)2個CpG島的甲基化水平，島1呈高甲基化水平，島2呈低甲基化水平。
　　2.ATXN3基因啟動子區(qū)DNA甲基化水平與SCA3/MJD患者的遺傳早現(xiàn)有關。<