人胃癌癌變相關(guān)蛋白分子的篩選.pdf

1、目的:胃癌是多種癌基因抑癌基因參與、多階段多途徑協(xié)同作用,使得胃粘膜逐步發(fā)展到癌前病變?cè)侔l(fā)展到胃癌的一個(gè)演變過程。國內(nèi)外也已開展了許多與這一演變過程相關(guān)的研究,但是這些研究多數(shù)是從某個(gè)或某幾個(gè)基因出發(fā)。另外,這些研究多集中在DNA和RNA水平,由于基因轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的復(fù)雜性,DNA和RNA水平的變化并不能完全反映蛋白質(zhì)水平的變化。蛋白質(zhì)是生理功能的執(zhí)行分子,為了了解細(xì)胞如何運(yùn)作,必需知道細(xì)胞中哪些蛋白質(zhì)表達(dá),它們?nèi)绾蜗嗷プ饔谩１狙芯坎捎?/p>

2、比較蛋白質(zhì)組學(xué)的方法,分析并鑒定在正常胃粘膜上皮、異型增生胃粘膜上皮和胃癌組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì),以期找出胃癌癌變相關(guān)蛋白質(zhì)。
　　方法:本研究應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分別分離正常胃粘膜、異型增生胃粘膜、胃癌組織的總蛋白質(zhì),經(jīng)改進(jìn)的膠體考馬斯亮藍(lán)染色、圖像掃描、PDquest軟件分析識(shí)別三者表達(dá)差異的蛋白質(zhì)點(diǎn),應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Ma

3、trix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)分析得到肽質(zhì)量指紋圖譜( peptide mass fingerprint, PMF),再經(jīng)Mascot軟件搜索SWISS-PROT和NCBI蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì),并利用生物信息學(xué)資源對(duì)所鑒定蛋白質(zhì)的功能和亞細(xì)胞定位等進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:本研究通過比較

4、正常胃粘膜、異型增生胃粘膜、胃癌組織雙向凝膠電泳圖譜的差異,發(fā)現(xiàn)了43個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn),并鑒定其中11個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)。11個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)按其功能分為五大類:氧化還原狀態(tài)調(diào)節(jié)蛋白,過氧化氧化還原蛋白5、黃曲霉素B1乙醛還原酶、短鏈?；?輔酶A脫氫酶、細(xì)胞色素C氧化酶多肽Va、細(xì)胞色素C氧化酶多肽VIb;分子伴侶,熱休克蛋白27、磷酸化熱休克蛋白27;免疫調(diào)節(jié)蛋白,第一型半乳糖結(jié)合蛋白;細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白,肌動(dòng)蛋白素-1;鈣結(jié)合蛋白,膜聯(lián)

5、蛋白A1、S100C蛋白。
　　結(jié)論:
　　1.正常胃粘膜、異型增生胃粘膜、胃癌組織之間存在差異表達(dá)蛋白質(zhì),篩選鑒定了11個(gè)與胃癌癌變相關(guān)的蛋白質(zhì)。
　　2.與正常胃粘膜相比,熱休克蛋白27、磷酸化熱休克蛋白27、第一型半乳糖結(jié)合蛋白、肌動(dòng)蛋白素-1、膜聯(lián)蛋白A1、S100C蛋白在異型增生胃粘膜中表達(dá)上調(diào);而過氧化氧化還原蛋白5、黃曲霉素B1乙醛還原酶、短鏈酰基-輔酶A脫氫酶、細(xì)胞色素C氧化酶多肽Va、細(xì)胞色素C氧化酶

6、多肽VIb在異型增生胃粘膜中呈低表達(dá)或表達(dá)缺失。
　　3.與正常胃粘膜相比,熱休克蛋白27、磷酸化熱休克蛋白27、第一型半乳糖結(jié)合蛋白、肌動(dòng)蛋白素-1、膜聯(lián)蛋白A1、S100C蛋白在胃癌組織中呈高表達(dá);而過氧化氧化還原蛋白5、黃曲霉素B1乙醛還原酶、短鏈酰基-輔酶A脫氫酶、細(xì)胞色素C氧化酶多肽Va、細(xì)胞色素C氧化酶多肽VIb在胃癌組織中呈表達(dá)降低或缺失。
　　4.與異型增生胃粘膜比較,胃癌組織中細(xì)胞色素C氧化酶多肽Va表達(dá)增