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文檔簡介
1、胃癌(GC)是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,其發(fā)病率占全球癌癥發(fā)病率的第5位,死亡率則位居2位。胃癌也是我國最常見的惡性腫瘤之一,分別占男女性癌癥發(fā)病率的第2位和第3位,死亡率均位于第2位。胃癌的早期診斷與治療對于改善患者預(yù)后具有重要作用,但我國早期胃癌的診斷率不足10%,半數(shù)以上的病例發(fā)現(xiàn)時已處于Ⅲ、Ⅳ期,出現(xiàn)了局部大血管侵犯或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,即使給予姑息手術(shù)聯(lián)合放化療治療,其遠(yuǎn)期預(yù)后也較差,5年生存率不足30%。現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)記物在早期胃癌中變化
2、不明顯,僅在部分進(jìn)展期胃癌中升高,因此迫切需要一種新的胃癌相關(guān)生物學(xué)標(biāo)記物,為胃癌的早期診斷和治療提供指導(dǎo)。microRNAs(miRNAs)的發(fā)現(xiàn)為胃癌的早期診斷提供了新的方向。miRNAs是一類長度在22 nt左右的內(nèi)源性非編碼小RNA,主要通過與Argonaute家族蛋白結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC),在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)mRNA的表達(dá)。大量研究顯示,miRNAs在調(diào)控癌細(xì)胞的生長、增殖、分化及凋亡中均發(fā)揮著重要作用,并與
3、癌癥的侵襲、轉(zhuǎn)移等過程相關(guān)。此外,研究顯示,在血漿中可檢測到穩(wěn)定表達(dá)的miRNAs,這些都為miRNAs應(yīng)用于胃癌的早期診斷提供了理論基礎(chǔ)。
目的:篩選胃癌血漿和組織中差異表達(dá)的miRNAs,評價其作為生物學(xué)標(biāo)記物對胃癌的診斷價值。
方法:收集42例胃癌患者血漿標(biāo)本、42例年齡和性別匹配的正常對照者血漿標(biāo)本,23對福爾馬林固定、石蠟包埋的胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本。應(yīng)用solexa測序,在8對胃癌血漿和正常血漿,8對胃癌
4、組織和癌旁組織中初步篩選胃癌差異表達(dá)的 miRNAs。在復(fù)篩階段,應(yīng)用 qRT-PCR逐步擴(kuò)大樣本進(jìn)一步驗(yàn)證差異表達(dá)的miRNA。然后,應(yīng)用ROC曲線分析篩選出的 miRNAs對胃癌的診斷價值。最后,對胃癌細(xì)胞培養(yǎng)基中的miRNAs表達(dá)水平進(jìn)行研究,分析血漿中miRNAs的可能來源。
結(jié)果:⑴胃癌血漿中檢測到635種 miRNAs的表達(dá),健康對照血漿中檢測到634種miRNAs,胃癌組織中檢測到1023種miRNAs,癌旁組織
5、中檢測到772種miRNAs。其中,血漿中差異表達(dá)的miRNAs有146種,組織中差異表達(dá)的miRNAs有207種,在血漿和組織中表達(dá)一致的miRNAs共有31種。⑵應(yīng)用qRT-PCR,在測序標(biāo)本(8對胃癌血漿和正常血漿,8對胃癌組織和癌旁組織)中對上一階段篩選出的31種miRNAs的表達(dá)水平進(jìn)行逐一驗(yàn)證,進(jìn)一步篩選差異表達(dá)的 miRNAs。結(jié)果顯示, miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p
6、、miR-654-3p在胃癌血漿及組織中的表達(dá)都是升高的,用于下一步驗(yàn)證。⑶在42例胃癌血漿和42例正常血漿,23對胃癌組織及癌旁組織中,進(jìn)一步驗(yàn)證上階段差異表達(dá)的5種 miRNAs。結(jié)果顯示,miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌血漿中的相對表達(dá)量(與U6比較,中位數(shù))依次為0.0169、0.0231、0.0282、0.0363、0.0058;在健康對照血漿中的
7、相對表達(dá)量依次為:0.0030、0.0101、0.0100、0.0157、0.0032;兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌組織中的相對表達(dá)量(與U6比較,中位數(shù))依次為:14.77、0.63、0.92、0.64、0.16;在癌旁組織中的相對表達(dá)量依次為:7.56、0.36、0.58、0.42、0.07;兩組之間的差異
8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌血漿及組織的表達(dá)中均明顯升高。⑷為了檢測5種miRNA對胃癌的診斷作用,對42例胃癌血漿患者及42例健康對照進(jìn)行 ROC曲線分析。結(jié)果顯示,單獨(dú)檢測 miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p的曲線下面積分別為:0.785(95%CI
9、:0.688~0.882)、0.766(95%CI:0.663~0.869)、0.743(95%CI:0.634~0.851)、0.729(95%CI:0.620,0.838)和0.724(95%CI:0.614~0.833)。聯(lián)合檢測miR-17-5p和miR-127-3p的曲線下面積可達(dá)0.810(95%CI:0.720~0.901)。以上結(jié)果表明檢測這5種miRNAs有助于胃癌的診斷。⑸為了解目的miRNA的檢測是否有助于早期胃癌
10、的診斷,本研究對健康對照、早期胃癌、進(jìn)展期胃癌血漿中5種miRNA表達(dá)水平進(jìn)行了對比研究。結(jié)果顯示,miR-433-3p、miR-654-3p在早期胃癌中未見明顯變化(P>0.05),僅在進(jìn)展期胃癌中可見明顯升高( P<0.05)。而 miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p的表達(dá)水平在早期胃癌中即出現(xiàn)了明顯升高(P<0.05),表明這3種miRNAs可能有助于早期胃癌的診斷。⑹在SGC7901胃癌細(xì)胞培養(yǎng)基中,m
11、iR-17-5p的表達(dá)量隨時間延長逐漸升高(P<0.05),而miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p無明顯變化(P>0.05)。結(jié)果提示血漿miR-17-5p水平升高,可能主要來源于胃癌細(xì)胞的分泌。
結(jié)論:①miR-17-5p、miR-127-3p、miR-379-5p、miR-433-3p、miR-654-3p在胃癌血漿和組織中表達(dá)升高。②血漿miR-17-5p、miR-127
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