胃癌相關(guān)基因高效篩選及其快速檢測的方法建立.pdf

1、背景：胃癌是源自胃粘膜上皮細胞的惡性腫瘤，占胃惡性腫瘤的95％，每年新發(fā)生占所有新發(fā)癌癥病例的9％。中國，日本，越南等東亞國家由于受傳統(tǒng)飲食習慣，氣候地理等影響胃癌致死率居世界前列，西方國家近年胃癌的發(fā)病率和死亡率也曾上升勢頭。胃癌在我國發(fā)病率很高，死亡率占惡性腫瘤第一位，全國胃癌平均死亡率高達20/10萬。胃癌的高轉(zhuǎn)移高侵襲性是致使其患者死亡的主要原因，因此早期檢測胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因?qū)︻A(yù)防其發(fā)生發(fā)展，預(yù)后及治療具有重要作用，是現(xiàn)階段胃癌

2、基礎(chǔ)研究的熱點之一。 目的：篩選高侵襲型胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能通路的分子水平機制。建立逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導的等溫擴增快速檢測高侵襲型胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。 方法：分別以年齡相近、性別相同的3例肝轉(zhuǎn)移胃癌病人標本的轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)灶為實驗組和對照組做高通量cDNA表達譜芯片，初選3張芯片共同上、下調(diào)基因；利用pathway V1.0分析軟件尋找初篩基因中存在多種可能影響胃癌發(fā)生發(fā)展及其轉(zhuǎn)歸的分子通路；通過RT-PCR

3、測定數(shù)例轉(zhuǎn)移胃癌病例原發(fā)和轉(zhuǎn)移灶中相關(guān)基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平?？焖俪樘岣无D(zhuǎn)移胃癌病人標本的RNA用環(huán)介導的等溫擴增反應(yīng)(LAMP)擴增轉(zhuǎn)移相關(guān)基因Serpinel，擴增條件為63℃保溫30分鐘，擴增后產(chǎn)物通過特異性內(nèi)切酶進行鑒定。 結(jié)果：通路分析篩選出來的上調(diào)基因CLDN1和下調(diào)基因IJGTlA10在6組病例中經(jīng)RT-PCR定性檢測全部與分析結(jié)果相符。RT-LAMP能特異性快速的擴增目的基因。 結(jié)論：pathway通路