山茱萸防治糖尿病腎病有效部位的研究.pdf

1、山茱萸為山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉。于秋末冬初果皮變紅時(shí)進(jìn)行采收，用文火烘或置沸水中略燙后及時(shí)除去果核，干燥而得。山茱萸味酸、澀、徼溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)益肝腎，澀精固脫之功效。它既能平補(bǔ)，又能固脫：既能補(bǔ)陰，又能壯陽，而且藥性平和，因此用途廣泛。
　　 本文對山茱萸防治糖尿病腎病的有效部位進(jìn)行了研究。
　　 文獻(xiàn)綜述研究，包括：山茱萸化學(xué)成分研究進(jìn)展，山茱萸藥理作用研究進(jìn)展，山茱萸環(huán)烯醚萜總苷的研究進(jìn)展，山茱萸多

2、糖的研究進(jìn)展。
　　 山茱萸防治糖尿病腎病有效部位的研究，包括：
　　 1、山菜萸藥材品質(zhì)評價(jià)及分析方法的建立。采用HPLC法測定了山茱萸藥材中馬錢苷和莫諾苷的含量。結(jié)果顯示，馬錢苷的含量達(dá)到7.8mg·g-1，莫諾苷的含量達(dá)到10.8mg·g-1。符合藥典“本品按干燥品計(jì)算，舍馬錢苷不得少于0.60％”的要求。此外，采用硫酸蒽酮法，測定了山茱萸中總多糖的含量，結(jié)果顯示，山茱萸中總多糖的平均含量為2.33％。
　　

3、 2、山茱萸中有效部位環(huán)烯醚萜總苷的提取。采用正交試驗(yàn)法。以馬錢苷、莫諾苷的提取率為指標(biāo)，優(yōu)選出最佳的醇提工藝為：山茱萸藥材用6倍量80％的乙醇提取2次，每次l小時(shí)。利用HPD100型大孔吸附樹脂對山茱萸總苷進(jìn)行精制，考察了樹脂的吸附容量，乙醇的洗脫濃度以及乙醇洗脫體積，從而確定了最佳工藝為：醇提液濃縮水沉，將上清液加水定容至0.5g生藥·mL-1，此提取液上大孔樹脂進(jìn)一步分離純化，上樣后，用30％的乙醇，12倍量進(jìn)行洗脫，洗脫液濃縮

4、，減壓干燥至恒重，得到山茱萸環(huán)烯醚萜總苷。
　　 3、山茱萸總多糖的提取。通過正交試驗(yàn)法，采用硫酸蒽酮法測定多糖的含量，優(yōu)選出多糖的最佳水提工藝為：山茱萸藥材用12倍量水煎煮2次，每次2小時(shí)。進(jìn)一步考察了多糖的醇沉工藝，得到其最佳工藝為：水提液濃縮至0.5g·mL-1，加95％的乙醇醇沉至80％。
　　 4、山茱萸防治糖尿病腎病活性部位群的篩選。運(yùn)用中藥血清藥理學(xué)方法研究山茱萸活性部位群對高糖致RMC增殖的體外抑制作用，

5、并與總提取物組進(jìn)行比較，優(yōu)選山茱萸防治糖尿病腎病的最佳活性部位群組合，采用四甲基氮唑鹽(MTT)比色法。結(jié)果顯示，山茱萸各有效部位合理組合后，具有不同程度的對抗高糖致RMC的增殖作用，并呈一定程度的量效關(guān)系，初步確定山茱萸總苷配伍多糖為防治糖尿病腎病的最佳活性部位群。另外，還通過對小鼠DN模型整體篩選，研究了山茱萸防治糖尿病腎病的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，確定有效部位在藥效靶點(diǎn)上的作用，追蹤活性部位(群)。分離、純化山茱萸中環(huán)烯醚萜總苷、多糖、三萜

6、酸，以環(huán)烯醚萜總苷為基礎(chǔ)將各有效部位進(jìn)行合理組合，以DN模型下的降血糖、降血清尿素氮活性及降低腎指數(shù)為指標(biāo)。并與總提取物組進(jìn)行比較，篩選、確定山茱萸防治DN的有效部位群。結(jié)果顯示。山茱萸各有效部位合理組合后，均能延緩小鼠腎病變的進(jìn)程及降低腎病變的嚴(yán)重程度。其中以山茱萸環(huán)烯醚萜總苷+多糖小劑量組效果最佳。所以。環(huán)烯醚萜總苷+多糖為山茱萸防治DN的最佳活性部位群。
　　 5、在體腸循環(huán)灌流法考察山茱萸中環(huán)烯醚萜總苷在大鼠小腸的吸收特

7、征，包括：
　　 (1)馬錢苷、莫諾苷在空白腸灌流液中的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，兩者在空白腸灌流液中孵育后的濃度為孵育前的98.56％、99.56％，兩者在腸循環(huán)液中比較穩(wěn)定。
　　 (2)腸壁對馬錢苷、莫諾苷物理吸附的影響。結(jié)果顯示，經(jīng)4h孵育后，馬錢苷濃度為原來濃度的(99.16±0.23)％(n=3)，莫諾苷濃度為原來濃度的(95.01±0.21)％(n=3)，可以認(rèn)為大鼠小腸壁對藥物基本沒有物理吸附。
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