山茱萸活性成分提取分離及其治療糖尿病并發(fā)癥研究.pdf

1、糖尿病是由于胰島功能障礙、胰島素抵抗等引起的機(jī)體內(nèi)碳水化合物代謝紊亂綜合征。糖尿病及其并發(fā)癥已經(jīng)成為繼心腦血管疾病、癌癥之后威脅人類生命健康的第三大殺手。目前對(duì)于糖尿病及其并發(fā)癥還沒(méi)有可以徹底根治的藥物。傳統(tǒng)的藥物治療除了治療費(fèi)用高昂，還給病患帶來(lái)很多副作用。此外，傳統(tǒng)藥物在降低血糖的同時(shí)難以兼顧糖尿病的并發(fā)癥，具有相當(dāng)?shù)木窒扌?。因此從傳統(tǒng)中藥中研究開發(fā)新的治療糖尿病及并發(fā)癥的藥物成為一個(gè)研究熱點(diǎn)。
　　 中藥山茱萸(Cornu

2、sofficinalisSieb.etZuee.)為山茱萸科(Cornaeeae)山茱萸屬(Comus)植物的去核干燥果肉，是我國(guó)常見的藥食兩用型藥材。山茱萸在我國(guó)用于治療消渴癥、糖尿病已有數(shù)千年的歷史，因其較高的應(yīng)用價(jià)值自古就受到關(guān)注，近代藥理學(xué)研究，山茱萸有降血糖、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗炎、抗休克、保肝及抗癌等作用。本論文主要根據(jù)山茱萸的降糖及抗氧化活性提取分離山茱萸的有效組分及成分。以HepG2細(xì)胞、α-葡萄糖苷酶和STZ誘導(dǎo)的小鼠

3、為模型，探求山茱萸抗氧化及降糖活性，研究比較山茱萸中各活性物質(zhì)對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥的影響。本文研究的主要內(nèi)容有:
　　 (1)山茱萸活性部位的篩選與純化
　　 采用溶劑梯度萃取及D101大孔樹脂分離，將山茱萸85％的乙醇回流提取物，劃分為多個(gè)活性組分，得到山茱萸總浸膏，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位，得到不同極性的山茱萸提取物。結(jié)合HepG2細(xì)胞消耗葡萄糖糖和活性氧抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果，初步篩選出乙酸乙酯萃取物（成分分析主要含有

4、五環(huán)三萜類）和正丁醇萃取物（主要含有環(huán)烯醚萜及其苷類）。正丁醇部位經(jīng)過(guò)D101大孔樹脂進(jìn)一步分離后，環(huán)烯醚萜及苷類在30％乙醇洗脫液中有效富集。將乙酸乙酯部位、正丁醇-D101大孔樹脂30％洗脫部位經(jīng)硅膠柱層析、葡聚糖凝膠SephadexLH-20柱層析后，得到熊果酸、馬錢苷、莫諾苷三個(gè)化合物。
　　 (2)山茱萸體外降糖實(shí)驗(yàn)
　　 以HepG2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)α-葡萄糖苷酶實(shí)驗(yàn)和作為評(píng)價(jià)降糖效果的依據(jù)。山茱萸乙酸乙酯和正丁醇部

5、位有較高的促進(jìn)細(xì)胞消耗葡萄糖的活性，而正丁醇-D101大孔樹脂-30％乙醇洗脫組分具有更強(qiáng)的促進(jìn)細(xì)胞消耗葡萄糖的活性。最終分離純化得到的單體化合物熊果酸、馬錢苷及莫諾苷具有最高的促進(jìn)細(xì)胞消耗葡萄糖的能力，由強(qiáng)到弱順序?yàn)轳R錢苷，莫諾苷，熊果酸。山茱萸各活性組分及活性成分對(duì)α-葡萄糖苷酶活性沒(méi)有顯著的抑制活性。其乙酸乙酯部位、正丁醇-D101大孔樹脂30％洗脫部位IC5o分別為2.40mg/ml和4.24mg/ml，化合物馬錢苷、莫諾苷和熊

6、果酸無(wú)明顯的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
　　 (3)山茱萸體外抗氧化實(shí)驗(yàn)
　　 以高糖環(huán)境下HepG2細(xì)胞作為研究山茱萸體外抗氧化的模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，乙酸乙酯部位具有較高的抑制氧化應(yīng)激的能力，減少細(xì)胞ROS的生成，其次為正丁醇-D101大孔樹脂30％洗脫部位。在3個(gè)化合物中，熊果酸活性最高，馬錢苷、莫諾苷兩種成分也具有一定抗氧化活性。
　　 (4)山茱萸對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型各生理指標(biāo)的影響
　　 在