經(jīng)腹主動脈局部灌注異丙酚對脊髓缺血再灌注損傷作用及其機制的實驗研究.pdf

1、迄今為止，盡管采用多種措施，仍無法有效防治各種原因造成的脊髓缺血再灌注損傷。本實驗擬通過阻斷腹主動脈建立脊髓缺血再灌注損傷動物模型，研究經(jīng)腹主動脈局部灌注異丙酚對脊髓缺血再灌注損傷的作用及其可能保護機制，為臨床防治因阻斷脊髓供血動脈所致的脊髓損傷提供新的思路及實驗依據(jù)。 方法：腎下阻斷新西蘭大耳白兔腹主動脈建立脊髓缺血再灌注損傷動物模型，通過研究阻斷不同時間再灌注后動物神經(jīng)行為學(xué)及組織病理學(xué)變化，確定常溫下脊髓可耐受缺血的腹主動

2、脈阻斷時限。按異丙酚單位時間內(nèi)灌注劑量不同，將實驗動物隨機分為6組，以生理鹽水為空白對照，10％脂肪乳為溶酶對照，比較異丙酚處理各組(P1、P2、P3、P4組)與生理鹽水組(NS組)及10％脂肪乳組(P0組)神經(jīng)行為學(xué)評分和脊髓前角正常神經(jīng)元計數(shù)及超微結(jié)構(gòu)的變化，研究阻斷同時，經(jīng)腹主動脈局部灌注不同劑量異丙酚對脊髓缺血再灌注損傷的作用，探討最佳保護劑量。采用硫代巴比妥酸(TBA)法和黃嘌呤氧化酶(XO)法測定脊髓組織的超氧化物歧化酶(S

3、OD)活性和丙二醛(MDA)含量；激光共聚焦顯微鏡與熒光探針標(biāo)記結(jié)合，檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度；原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測脊髓前角神經(jīng)細胞的凋亡水平，免疫組化法測定Caspase-3蛋白的陽性表達程度，研究異丙酚減輕脊髓缺血再灌注損傷的可能機制。 結(jié)果：阻斷20分鐘無一例動物發(fā)生截癱；阻斷30分鐘80％動物出現(xiàn)截癱；阻斷60分鐘所有動物均為截癱。異丙酚處理各組(P1、P2、P3、P4組)與生理鹽水組(NS組)及10％脂肪乳組(

4、P0組)比較，神經(jīng)功能明顯改善，脊髓組織學(xué)損傷較輕。隨異丙酚劑量的增加，動物神經(jīng)行為學(xué)評分等級逐漸升高，脊髓前角正常神經(jīng)元計數(shù)逐漸增加，超微結(jié)構(gòu)改變逐漸減輕，以50mg/kg(P3組)最優(yōu)。而當(dāng)劑量增至60mg/kg(P4組)時，以上指標(biāo)反而變差。P1、P2、P3、P4各組的平均動脈壓均低于NS組及P0組，且以P4組血壓最低。與正常組織(N組)相比，脊髓損傷后組織SOD活性降低，MDA含量及脊髓前角神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子熒光強度增高，TUNE

5、L陽性細胞增多，Caspase-3表達增加。與NS組及P0組比較，P1、P2、P3、P4組的SOD活性升高，MDA含量降低，脊髓前角神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子熒光強度較低，TUNEL陽性細胞減少，Caspase-3表達IOD值降低。P1、P2、P3、P4組間有明顯差異，以P3組變化最為明顯。 結(jié)論：本實驗成功建立脊髓缺血再灌注損傷的動物模型，并發(fā)現(xiàn)常溫下新西蘭兔脊髓耐受腎下腹主動脈阻斷所致缺血，而不發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷的時限為20分鐘以內(nèi)。進一步