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文檔簡介
1、背景:腎臟的缺血再灌注損傷可導致急性腎功能衰竭,該病理生理過程常見于心血管手術,臟器移植手術,低血容量休克,膿毒性休克等ICU行機械通氣患者也可單獨發(fā)生或合并其他臟器衰竭,嚴重威脅患者生命。在麻醉或鎮(zhèn)靜過程中選擇合適的藥物對腎臟缺血再灌注損傷進行加以保護尤為重要。
丙泊酚是麻醉及ICU常用的鎮(zhèn)靜藥物,已有報道認為可以減輕多種臟器(包括腦,心臟,肝臟等)的缺血再灌注損傷,丙泊酚對腎臟缺血再灌注損傷的保護作用及相關機制還少有研
2、究,我們進行了細胞及大鼠在體的研究以闡述相關保護作用及分子機制。
第一部分:
方法:使用Antimycin A耗竭ATP處理人腎小管上皮細胞(HKC)后更換正?;|復制腎臟缺血再灌注損傷的細胞模型。研究分為:1)對照組;2)細胞與丙泊酚(20umol/L)共培養(yǎng)組;3)缺血再灌注損傷組;4)細胞與丙泊酚(20umol/L)共培養(yǎng)后給予缺血再灌注損傷組。Hoechst-33258染色檢測HKC細胞凋亡,MTT比
3、色法測定各組細胞活力,熒光流式細胞術檢測細胞內ROS含量,化學發(fā)光法測定各組細胞總SOD活性,TBA比色法檢測細胞內丙二醛,Western blot檢測HKC細胞caspase-3的表達,Electrophoretic Mobility Shift Assay(EMSA)檢測NF-κB的表達,激光共聚焦檢測HIF1-α的表達,Western-blot檢測HIF1-α表達量。
結果:ATP耗竭處理后能引起SOD活性減低,清除
4、氧自由基減少,導致細胞活性氧(ROS)產生增加,直接產物MDA水平升高,同時Caspase-3活性明顯增強,細胞凋亡增加,細胞存活數量減少。反映炎癥反應的NF-κ B激活,丙泊酚預處理能夠使缺血/再灌注情況下的HKC細胞內SOD活性的減低有所減輕,進而能夠清除更多的氧自由基,使MDA和ROS產生減少,相比損傷組,丙泊酚預處理caspas-3活性及NF-κ B激活有部分抑制,使HKC細胞凋亡減少。單獨將細胞與丙泊酚共培養(yǎng)組HIF1-α表達
5、與空白對照組相比無差異,均處于低水平。
結論:丙泊酚預處理對腎近曲小管細胞缺血再灌注損傷有保護作用,其分子機制包括減輕氧自由基基損害,減少細胞凋亡,抑制炎癥反應,但并沒有誘導細胞自我保護機制HIF-1α表達。
第二部分
方法:Wistar大鼠隨機分為5組:((I))對照組;(ii)假手術對照組;(iii)丙泊酚(25mg/kg/h)對照組;(iv)缺血再灌注組;(v)丙泊酚預處理后缺血再灌注組。
6、雙側腎動脈夾閉60分鐘,再灌注24小時候分別取血及腎臟組織進行損傷的評估及分子生物學分析。光鏡觀察腎臟病理改變,腎小管病理改變評分采用半定量方法,檢測大鼠腎功能(肌酐、胱抑素C),檢測腎組織SOD及MDA水平評價氧自由基損害程度。使用Western bloting及northen-blotting分析caspas-3活性,EMSA檢測NF-κ B的表達,Western bloting定量腎組織HIF-1α。
結果:模型中缺
7、血再灌注使腎組織腎小管上皮細胞刷狀緣脫落,腎小管管腔擴張,蛋白管型明顯增加,間質炎細胞浸潤,組織學評分較對照組顯著增高,腎功能指標血清肌酐和胱抑素C顯著增加,同時腎組織SOD及MDA水平,caspas-3,NF-KB活性明顯增加。丙泊酚預處理顯著減輕了組織學損傷及血清腎功能指標,與此同時腎組織SOD降低及MDA升高水平均較損傷組減輕。丙泊酚預處理部分抑制了缺血再灌注損傷導致的Caspase-3及NF-(K) B激活。丙泊酚輸注組HIF-
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