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文檔簡介
1、目的: 增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變是嚴(yán)重的致盲性眼病之一,臨床上復(fù)雜難治。玻璃體切割術(shù)雖可有效切除增生膜,解除視網(wǎng)膜牽拉,但卻不能徹底解決增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變形成的根本問題一細(xì)胞增生。因此藥物防治增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變具有非常重要的意義。醫(yī)用幾丁糖(chitosan)具有良好的生物相容性和緩釋性,可以抑制成纖維細(xì)胞及視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增生,且玻璃體腔內(nèi)填充醫(yī)用幾丁糖對兔眼內(nèi)組織結(jié)構(gòu)無明顯影響。本實(shí)驗(yàn)通過制備增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變動
2、物模型,玻璃體腔內(nèi)注射不同濃度的醫(yī)用幾丁糖,觀察術(shù)后不同時(shí)期玻璃體視網(wǎng)膜的改變,應(yīng)用酶連免疫吸附實(shí)驗(yàn)和放射免疫方法分別對玻璃體腔內(nèi)堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)的含量進(jìn)行定量分析及觀察視網(wǎng)膜組織病理學(xué)改變,探討醫(yī)用幾丁糖對增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的防治作用。為醫(yī)用幾丁糖防治增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 選用健康新西蘭大白兔40只,左眼為實(shí)驗(yàn)眼。隨機(jī)分為5組,正常對照
3、組:玻璃體腔內(nèi)不予注射:模型組:玻璃體腔內(nèi)注射0.1ml生理鹽水和0.1ml自血;實(shí)驗(yàn)1、2、3、組玻璃體腔內(nèi)分別注射0.ml醫(yī)用幾丁糖(5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml)和0.1ml自血。用裂隙燈顯微鏡、眼底鏡、B超觀察記錄玻璃體視網(wǎng)膜的情況。各組實(shí)驗(yàn)動物分別于術(shù)后第28天麻醉下抽取玻璃體后立即摘除眼球,去除角膜和晶體,取距視盤2PD的顳側(cè)視網(wǎng)膜組織10mm×10mm大小,固定于10%甲醛溶液中,石蠟包埋,制成組織切片。用
4、HE染色法,光鏡下觀察視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)。應(yīng)用酶連免疫吸附實(shí)驗(yàn)和放射免疫方法分別定量檢測玻璃體腔內(nèi)bFGF和IL-6的含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。 結(jié)果: 1 裂隙燈顯微鏡、眼底鏡觀察不同時(shí)期玻璃體視網(wǎng)膜的增生情況第1、3、7天時(shí)實(shí)驗(yàn)1、2、3組玻璃體視網(wǎng)膜增生級別較模型組無顯著差異性(P>0.05),但增生相對較緩慢。第14天時(shí)模型組、實(shí)驗(yàn)1、2、3組的平均增生級別分別為:2.63、2.25、1.38、0
5、.75,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)秩和檢驗(yàn)P=0.0047;第21天時(shí)各組的平均增生級別分別為:3.00、2.5、2.07、0.93,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)秩和檢驗(yàn)P=0.0098;第28天時(shí)各組的平均增生級別分別為:3.13、2.63、2.38、1.07,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)秩和檢驗(yàn)P=0.0092;第14天、21天、28天時(shí)各組間均有顯著性差異(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)3組PVR嚴(yán)重程度均顯著低于模型組及另2個(gè)治療組(P<0.05),而實(shí)驗(yàn)1、2組與模型組間比較均無顯著差異性(P
6、>0.05)。 2 B超正常對照組:玻璃體腔透明,未見異常回聲。第1天,模型組及實(shí)驗(yàn)各組:玻璃體腔內(nèi)可探及局限性團(tuán)狀中強(qiáng)回聲光斑。第3天,模型組及實(shí)驗(yàn)各組:玻璃體腔內(nèi)可探及絮狀、點(diǎn)片狀,團(tuán)塊狀中強(qiáng)回聲光斑。第7天,模型組:玻璃體腔內(nèi)可探及形態(tài)不規(guī)則,強(qiáng)度不等的條狀中強(qiáng)回聲光帶,不與眼球壁相連,有明顯的后運(yùn)動;實(shí)驗(yàn)3組:玻璃體內(nèi)可探及大量點(diǎn)狀、片狀、條狀中強(qiáng)回聲光斑,不與眼球壁光帶相連,有明顯后運(yùn)動。第14天,模型組:玻璃體腔內(nèi)可
7、探及絮狀、片狀,條狀強(qiáng)回聲光斑,不與眼球壁相連,有明顯的后運(yùn)動;實(shí)驗(yàn)3組:玻璃體腔內(nèi)可探及點(diǎn)片狀、條狀中強(qiáng)回聲光斑,不與眼球壁相連,有明顯的后運(yùn)動。第21天,模型組:玻璃體腔內(nèi)可探及聚集成片的中強(qiáng)回聲光斑及條狀強(qiáng)回聲光帶,不與眼球壁相連,有明顯的后運(yùn)動;實(shí)驗(yàn)3組:玻璃體腔內(nèi)可探及不均勻的、長短不一、走行不規(guī)則的中強(qiáng)回聲光帶,與眼球壁單一接觸的有明顯后運(yùn)動。第28天,模型組:玻璃體腔內(nèi)可探及形態(tài)不規(guī)則、強(qiáng)度不等的條帶狀強(qiáng)回聲光帶,與眼球壁
8、光帶相連,缺乏后運(yùn)動;實(shí)驗(yàn)3組:玻璃體腔內(nèi)可探及形態(tài)不規(guī)則的中強(qiáng)回聲光斑,不與眼球壁光帶相連,有明顯的后運(yùn)動。 3 bFGF,IL-6含量的定量分析結(jié)果3.1與正常對照組比較模型組中bFGF的含量(282.20±32.88)pg/ml,明顯高于正常對照組(86.29±11.05)pg/ml,(P<0.01);實(shí)驗(yàn)1、2、3組中bFGF的含量分別為(231.01±50/79)pg/ml、(145.79±33.77)pg/ml、(123.4
9、5±25.14)pg/ml,均較正常對照組顯著升高(實(shí)驗(yàn)1、2組與正常對照組比較P<0.01,實(shí)驗(yàn)3組與正常對照組比較P<0.05);模型組中IL-6的含量(295.97±106.40)pg/ml,顯著高于正常對照(37.97±4.66)pg/ml,(P<0.01);實(shí)驗(yàn)1、2、3組中IL-6含量分別為(230.08±51.28)pg/ml、(169.31±42.07)pg/ml、(116.83±17.04)pg/ml,均較正常對照組顯
10、著升高(P均<0.01)。 3.2與模型組比較實(shí)驗(yàn)1、2、3組中bFGF的含量均顯著低于模型組(P均<0.01);實(shí)驗(yàn)1、2、3、組中IL-6含量均顯著低于模型組(實(shí)驗(yàn)1組與模型組比較P<0.05,實(shí)驗(yàn)2、3組與模型組比較P均<0.01)。 3.3實(shí)驗(yàn)組間比較實(shí)驗(yàn)2、3組bFGF的含量與實(shí)驗(yàn)1組比較均有顯著性差異(P<0.01),實(shí)驗(yàn)2組與實(shí)驗(yàn)3組比較無顯著性差異(P>0.05);實(shí)驗(yàn)2、3組IL-6的含量與實(shí)驗(yàn)1組比較均有顯著
11、性差異(實(shí)驗(yàn)2組與實(shí)驗(yàn)1組比較P<0.05,實(shí)驗(yàn)3組與實(shí)驗(yàn)1組比較P<0.01);實(shí)驗(yàn)2組與實(shí)驗(yàn)3組比較無顯著性差異(P>0.05)。 4 組織病理學(xué)改變正常對照組:視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)清晰,未見水腫及細(xì)胞數(shù)量的變化,玻璃體腔透明,未見滲出、出血及纖維增生膜形成;模型組:視網(wǎng)膜可見神經(jīng)纖維層局部性水腫,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層輕度水腫,細(xì)胞數(shù)減少,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加,玻璃體腔中有少量滲出和出血,有纖維增殖膜形成,其內(nèi)有圓形和梭形細(xì)胞:實(shí)驗(yàn)1
12、組:視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)紊亂,神經(jīng)纖維層局部性水腫,玻璃體腔內(nèi)有滲出和出血,有纖維增殖膜形成;實(shí)驗(yàn)2組:視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)紊亂,神經(jīng)纖維層局部性水腫,玻璃體腔內(nèi)可見纖維素性滲出及增殖膜形成;實(shí)驗(yàn)3組:視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)稍紊亂,細(xì)胞排列整齊,局部性神經(jīng)纖維層水腫,玻璃體腔內(nèi)有少許滲出物附于內(nèi)界膜上。 結(jié)論: 1 bFGF、IL-6的含量在PVR模型組較正常對照組明顯升高,說明bFGF、IL-6參與了增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的發(fā)
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