粘多糖貯積癥Ⅱ型的分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、目的:建立粘多糖貯積癥Ⅱ型患者艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)基因突變的檢測(cè)方法,探討患者IDS基因的常見基因突變類型及突變與表型的相關(guān)性.方法生化檢測(cè)診斷為粘多糖貯積癥Ⅱ型,應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增IDS基因常見突變外顯子2、3、5、7、8、9,PCR產(chǎn)物經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析,采用中性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè),出現(xiàn)異常電泳條帶的標(biāo)本進(jìn)行DNA測(cè)序,生物信息學(xué)相關(guān)軟件分析確定基因突變存在及其類型,限制性酶切分析驗(yàn)證突變.結(jié)果在4

2、個(gè)家系中,篩查出2例粘多糖貯積癥Ⅱ型IDS基因突變攜帶者、2例患者,DNA序列分析發(fā)現(xiàn)一患者的外顯子7發(fā)生一個(gè)新的點(diǎn)突變(G1253T),一患者外顯子9發(fā)生一個(gè)新的點(diǎn)突變(C1672T),另兩例患者未查到突變.限制性酶切分析示預(yù)期電泳條帶,酶切結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了序列分析結(jié)果.結(jié)論聯(lián)合應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、DNA測(cè)序和聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析能快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出粘多糖貯積癥Ⅱ型患者及攜帶者基因突變位點(diǎn),為粘多糖