粘多糖貯積癥ⅢB(MPS ⅢB)疾病模型豬研究.pdf

1、豬肉是人類重要的肉食品之一，此外，相比大鼠和小鼠，豬在遺傳、解剖、生理代謝和疾病特征上與人更為相似，且相比靈長(zhǎng)類動(dòng)物，豬的倫理方面的爭(zhēng)議較少，因此豬是人類生物醫(yī)學(xué)研究的理想動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)室前期獲得了一批轉(zhuǎn)基因克隆豬，其中一頭祖代公豬因外源基因插入12號(hào)染色體(SSC12)的NAGLU基因第六個(gè)外顯子(exon6)，破壞了該基因的開放閱讀框。在人上該基因的功能喪失性突變會(huì)導(dǎo)致粘多糖貯積癥ⅢB型(MPSⅢB)疾病。本研究以該祖代豬的F1后

2、代及F1代MPSⅢB公豬和MPSⅢB母豬的半同胞交配所獲得F2個(gè)體為研究對(duì)象，對(duì)因外源基因插入而導(dǎo)致的MPSⅢB豬進(jìn)行系統(tǒng)的表型鑒定，為人類MPSⅢB疾病研究提供借鑒。本研究首先利用常規(guī)PCR、多重PCR、相對(duì)熒光定量PCR和絕對(duì)熒光定量PCR對(duì)45頭F2個(gè)體及45和28日齡胚胎開展純合子鑒定，均未檢測(cè)到NAGLU-/-純合子個(gè)體，推測(cè)純合子個(gè)體在胚胎期死亡。針對(duì)3頭180日齡F1代MPSⅢB患病豬(NAGLU+/-)和1頭正常豬開展核

3、磁共振掃描、CT掃描和X射線掃描分析。核磁共振及CT掃描均發(fā)現(xiàn)患病個(gè)體存在不同程度的腦萎縮，核磁共振分析還揭示大腦內(nèi)囊區(qū)異常、頂額葉和丘腦異常、腦室擴(kuò)張、小腦萎縮等癥狀，四肢X射線掃描并未見明顯的病理改變。針對(duì)3頭2.5歲MPSⅢB豬的大腦和肝臟開展免疫組化分析，發(fā)現(xiàn)患病個(gè)體的NAGLU含量明顯低于陰性個(gè)體，且患病個(gè)體存在明顯的組織病變。本研究中的NAGLU+/-豬表現(xiàn)出與人類MPSⅢB疾病相似的病理特征，表明該患病豬群是理想的MPSⅢ