粘多糖貯積癥I型的分子遺傳學(xué)診斷和Zellweger綜合征的臨床及基礎(chǔ)研究.pdf

1、第一部分粘多糖貯積癥Ⅰ型分子遺傳學(xué)診斷
　　 [目的]
　　 粘多糖貯積癥(Mucopolysaccharidosis,MPS),是由于特定溶酶體酶的先天性缺乏或缺陷導(dǎo)致的糖胺聚糖降解代謝障礙,代謝底物堆積引起的一組具有相似表型的遺傳性代謝病。其中MPSⅠ為α-L-艾杜糖苷酸酶(α-L—iduronidaseIDUA)缺陷所致的常染色體隱性遺傳病,累及全身多系統(tǒng),致死率和致殘率較高。目前國(guó)內(nèi)主要通過(guò)酶學(xué)檢測(cè)診斷本病,尚無(wú)

2、大宗病例基因診斷學(xué)報(bào)道。本研究旨在尋找中國(guó)人粘多糖貯積癥Ⅰ型基因突變譜,初步探討中國(guó)人粘多糖貯積癥Ⅰ型臨床表型與基因型的關(guān)系,擬建立分子生物學(xué)診斷方法對(duì)MPSⅠ患者進(jìn)行雙重診斷及并對(duì)再孕母親進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷,進(jìn)一步提高診斷準(zhǔn)確性。
　　 [方法]
　　 采用PCR及直接測(cè)序技術(shù)對(duì)57例中國(guó)大陸地區(qū)經(jīng)酶學(xué)檢測(cè)確診的MPSⅠ患者 IDUA基因進(jìn)行全基因突變檢測(cè),對(duì)發(fā)現(xiàn)的未知突變進(jìn)行親本來(lái)源驗(yàn)證,并進(jìn)行保守性分析及人群分析。應(yīng)

3、患者家庭產(chǎn)前診斷要求,知情同意后抽取5例先證者母親孕18周羊水,提取DNA,應(yīng)用PCR及測(cè)序方法結(jié)合酶學(xué)檢測(cè)對(duì)胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷。
　　 [結(jié)果]
　　 57例MPSⅠ患者中共發(fā)現(xiàn)41種突變(表4),其中14種為已知突變,27種為我們首次發(fā)現(xiàn)的新突變:其中起始密碼突變1種:c.2T>C；錯(cuò)義突變8種:c.98A>C,c.156C>A,c.503G>T,c.536C>G,c.546G>C,c.710T>G,c.713T>G和

4、c.1262T>C；剪切位點(diǎn)突變8種:c.1-2C>G,c.296+4G>A,c.300-1G>C,c.973-4G>A,c.792+1G>C,c.1189+5G>T,c.1402+1G>T,c.1402+2T>G:插入突變1種:c.668-670ins GCG;重復(fù)5種,c.531dupT,c.657dupG,c.883dupC,c.1147dupG,c.1225dupG;缺失突變3種:c.349delT,c.1593delG,c.1

5、244—1270del27；無(wú)義突變1種:c.123G>A,同時(shí)檢測(cè)出11種已知多態(tài)性。
　　 [結(jié)論]
　　 中國(guó)人粘多糖貯積癥Ⅰ型患者IDUA基因突變特點(diǎn)不同于其他國(guó)家和地區(qū),而有自己的特點(diǎn)。本研究初步建立了分子生物學(xué)診斷方法及基因?qū)W產(chǎn)前診斷方法,與臨床診斷及酶學(xué)診斷相結(jié)合進(jìn)一步提高了診斷的準(zhǔn)確性。本研究首次在國(guó)內(nèi)應(yīng)用分子遺傳學(xué)方法進(jìn)行了5例產(chǎn)前基因診斷,1例回顧性診斷,其中3例為風(fēng)險(xiǎn)胎兒,3例為正常胎兒,產(chǎn)前基因診

6、斷結(jié)果與酶學(xué)產(chǎn)前診斷結(jié)果相符合。
　　 第二部分Zeuweger綜合征的臨床和基礎(chǔ)研究
　　 【目的】Zellweger綜合征(ZS)，又稱腦肝腎綜合征．屬于過(guò)氧化物酶體病的一種，呈常染色體隱性遺傳。臨床表現(xiàn)以多發(fā)性先天畸形、發(fā)育遲緩或不發(fā)育、肝腎功能異常、進(jìn)行性肌張力減低為特征。該病患兒病情常較危重，通常于1歲之前死亡。ZS的致病基因?yàn)镻EX基因，主要編碼過(guò)氧化物酶體內(nèi)與代謝相關(guān)的各種蛋白，發(fā)生突變后將會(huì)影響過(guò)氧化物酶

7、體中初生蛋白的功能，該初生蛋白包含過(guò)氧化物酶體導(dǎo)向信號(hào)1(PTS1)或?qū)蛐盘?hào)2(PTS2)，當(dāng)該蛋白發(fā)生功能障礙使翻譯后蛋白不能正常轉(zhuǎn)運(yùn)入過(guò)氧化物酶體，從而導(dǎo)致代謝功能障礙。目前共發(fā)現(xiàn)12種不同基因，其中任何一個(gè)發(fā)生突變均可導(dǎo)致本病。絕大部分突變主要集中在PEX1、PEX2、PEX10、PEX12、PEX26五種基因內(nèi)，約占90％以 上。目前已有多個(gè)國(guó)家對(duì)本病進(jìn)行了大量相關(guān)研究，但國(guó)內(nèi)對(duì)Zellweger綜合征的研究甚少，認(rèn)識(shí)不足，目

8、前尚未有對(duì)該類疾病的診斷及報(bào)道。本研究旨在對(duì)一臨床擬診為ZS的患兒進(jìn)行基因突變檢測(cè)，并試圖分析其臨床表型和基因型的關(guān)系。
　　 【方法】一例主要表現(xiàn)為發(fā)育遲緩、特殊面容、肝功能異常、肌張力進(jìn)行性減低、極長(zhǎng)鏈脂肪酸極度升高的患兒，臨床擬診為ZS。先證者，連同其健康父母均被列為研究對(duì)象。用鹽析法從外周血白細(xì)胞中提取基因組DNA，按文獻(xiàn)所報(bào)道方法用PCR擴(kuò)增PEX1、PEX2、PEX10、PEX12、PEX26五種突變高發(fā)外顯子和外顯