Brugada綜合征臨床特點(diǎn)及SCN5A基因分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、一、目的:1、總結(jié)中國(guó)人Brugada綜合征的臨床特征;2、尋找中國(guó)人心源性猝死相關(guān)基因SCN5A新的突變位點(diǎn);3.構(gòu)建包含突變體的hH1真核表達(dá)載體.二、方法:1.收集中國(guó)人Brugada綜合征患者26例的臨床和心電圖資料,結(jié)合文獻(xiàn)分析總結(jié)其臨床特征;2.利用多聚酶鏈反應(yīng)及DNA直接測(cè)序?qū)?個(gè)Brugada綜合征家系和2例特發(fā)性J波SCN5A基因的全部28個(gè)外顯子進(jìn)行PCR擴(kuò)增和直接測(cè)序工作,尋找中國(guó)人SCN5A基因中新的突變位點(diǎn).測(cè)

2、序結(jié)果與Gene bank中的序列進(jìn)行對(duì)比,比較有無核苷酸的改變;3.根據(jù)完整的pRc/CMV-hH1真核載體的限制性內(nèi)切酶酶切圖譜,在N1774S突變位點(diǎn)的上游和下游各有一個(gè)單一的限制性內(nèi)切酶Psha I及Xba I酶切位點(diǎn),根據(jù)這兩個(gè)酶切位點(diǎn)和突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)兩對(duì)引物,將突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)在引物上,通過重疊延伸PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增片段上含有所需要的突變位點(diǎn),最后將擴(kuò)增片段克隆入pRc/CMV-hH1中,通過測(cè)序驗(yàn)證定點(diǎn)誘變是否成功.三、結(jié)論:1、