生物發(fā)酵法制備粘多糖A的研究.pdf

1、粘多糖是由氨基己糖和糖醛酸組成的一類微生物多糖的統(tǒng)稱，是含氮的雜多糖，廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)，尤其結(jié)締組織中含量特別高，因其溶液多具有較高粘度而得名，也稱糖胺聚糖。粘多糖按照單糖組成、分子量及官能團(tuán)等可以分為硫酸皮膚素、硫酸類肝素、硫酸角質(zhì)素、硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸等幾類，它們?cè)卺t(yī)藥、美容、環(huán)保、化工等領(lǐng)域均表現(xiàn)出了優(yōu)良特性，具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　 本實(shí)驗(yàn)室從牛鼻粘膜中篩選誘變得到一株獸疫鏈球菌BU100，證實(shí)穩(wěn)定高產(chǎn)一種新型粘多

2、糖A。前期研究初步確定了粘多糖A的發(fā)酵條件和分離純化方法，并通過(guò)一系列鑒定方法基本確定了粘多糖A的結(jié)構(gòu)。本文的研究主要包括發(fā)酵條件的優(yōu)化，分離純化方法的改進(jìn)優(yōu)化，及粘多糖A合成相關(guān)基因的初步研究等三個(gè)部分。
　　 首先，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化了獸疫鏈球菌BU100生產(chǎn)粘多糖A的發(fā)酵培養(yǎng)基組成，確定了最佳配比的培養(yǎng)基如下(g/L):蔗糖15，混合氮源(魚(yú)蛋白胨-酵母膏1∶1)10，牛肉粉5，KH2PO42，NaH2PO42，NaHC

3、O32，MgSO4·7H2O2。同時(shí)，采用單因素法優(yōu)化了搖瓶培養(yǎng)的溫度、初始pH值及搖床轉(zhuǎn)速等條件，優(yōu)化后的培養(yǎng)條件為溫度30℃，初始pH值5.0，搖床轉(zhuǎn)速160 r·min-1，結(jié)合優(yōu)化后的培養(yǎng)基進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)發(fā)酵，得到粘多糖A的產(chǎn)率為10.09 g·L-1;并結(jié)合已有發(fā)酵條件，采用5L發(fā)酵罐對(duì)BU100進(jìn)行擴(kuò)大發(fā)酵，得到粘多糖A的發(fā)酵產(chǎn)率為20.48 g·L-1。
　　 其次，對(duì)粘多糖A硅藻土板框過(guò)濾裝置進(jìn)行改進(jìn)，在進(jìn)液口增加

4、緩沖裝置，采用改進(jìn)后的板框設(shè)備純化粘多糖A粗品溶液，循環(huán)過(guò)濾2次后溶液即達(dá)到澄清，在600nm測(cè)定菌體濃度吸光度僅為0.002，菌體去除率達(dá)到95.10％，粘多糖A損失率為21.40％，殘留蛋白含量符合標(biāo)準(zhǔn)(＜0.1％)。
　　 最后，從菌種BU100中提取得到完整的基因組，分別參照sz-hasA基因序列，sz-hasA基因中的一段保守序列，以及sz-hasA基因上下游非編碼區(qū)的序列設(shè)計(jì)引物，嘗試對(duì)合成粘多糖A的相關(guān)基因進(jìn)行克隆