PPARγ依賴的信號(hào)通路介導(dǎo)依澤替米貝對(duì)血管平滑肌細(xì)胞膽固醇蓄積的抑制作用.pdf

1、目的：觀察依澤替米貝對(duì)平滑肌細(xì)胞膽固醇蓄積的影響，并初步探討PPARγ依賴的信號(hào)通路介導(dǎo)依澤替米貝對(duì)血管平滑肌細(xì)胞膽固醇蓄積的抑制作用。 方法：首先以原代培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（VSMCs）為研究對(duì)象，以20mg/L Chol:MβCD作用于細(xì)胞48h，造成荷脂細(xì)胞模型。然后以不同濃度的依澤替米貝（3μmol/L，10μmol/L，30μmol/L）處理細(xì)胞24h，或以30μmol/L依澤替米貝分別處理細(xì)胞不同時(shí)間（0h，6h

2、，12h，24h，48h），用HPLC檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇（TC）、游離膽固醇（FC）的含量，用油紅O染色觀察細(xì)胞荷脂情況，用Western 印跡法檢測(cè)caveolin-1、nSREBP-1、LXRα蛋白的表達(dá), 用免疫熒光法檢測(cè)caveolin-1及ABCA1的蛋白表達(dá)，用RT-PCR檢測(cè)PPARγ和ABCA1的mRNA變化。最后將帶有PPARγ siRNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到VSMCs內(nèi)，同樣以20mg/L Chol:MβCD孵育細(xì)胞48h和

3、以30μmol/L依澤替米貝作用24h，再檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TC、FC的含量，檢測(cè)caveolin-1、LXRα蛋白的表達(dá)及觀察ABCA1的mRNA變化。 結(jié)果：不同濃度依澤替米貝（3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L）作用于VSMCs源性荷脂細(xì)胞24h，濃度依賴性地降低細(xì)胞內(nèi)TC、FC的含量，30μmol/L作用最強(qiáng)； 30μmol/L依澤替米貝作用于VSMCs源性荷脂細(xì)胞不同時(shí)間（0h，6h，12h，24h，48h），

4、同樣降低細(xì)胞內(nèi)TC、FC和膽固醇酯（CE）的水平，其最佳作用時(shí)間在24h時(shí)。同時(shí)抑制nSREBP-1的表達(dá)，明顯增加細(xì)胞caveolin-1、LXRα蛋白的表達(dá)水平及ABCA1 mRNA表達(dá)水平，但PPARγ的mRNA水平?jīng)]有明顯變化。用攜帶有PPARγ SiRNA的質(zhì)粒pSliencer 2.1-U6 hygro轉(zhuǎn)染VSMCs后，細(xì)胞內(nèi)的TC、FC 、CE水平較30μmol/L依澤替米貝組有所升高，且caveolin-1、LXRα蛋白