Geminin在大鼠血管平滑肌細(xì)胞分化表型轉(zhuǎn)化中的介導(dǎo)作用.pdf

1、一、研究背景
　　 血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells,vsMCs)表型轉(zhuǎn)化是動(dòng)脈粥樣硬化及血管成形術(shù)后再狹窄等血管疾病發(fā)生發(fā)展關(guān)鍵性的病理過(guò)程，但是其發(fā)病機(jī)制仍不甚清楚。目前對(duì)通過(guò)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化進(jìn)而探討再狹窄等疾病發(fā)病機(jī)制的研究越來(lái)越受到關(guān)注，對(duì)細(xì)胞周期起始特許阻遏子Geminin的研究已成為熱點(diǎn)。多細(xì)胞動(dòng)物Geminin通過(guò)整合細(xì)胞周期和分化在增殖-分化過(guò)程中起“開(kāi)關(guān)”作用。它既能使細(xì)胞穩(wěn)

2、定在分化表型、又能阻抑去分化表型細(xì)胞DNA 再?gòu)?fù)制，以確?；蜻z傳的穩(wěn)定性。
　　 血管VSMCs通常有兩種不同的表型:合成表型和收縮表型，兩者在一定條件下可以相互轉(zhuǎn)化。正常成人的血管壁VSMCs呈收縮表型。在體外培養(yǎng)或血管壁損傷等情況下，VSMCs 可由收縮型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣尚停⑾騼?nèi)膜遷移、增殖。合成型VSMCs分化程度低或未分化，可以進(jìn)一步分泌細(xì)胞外基質(zhì)和合成血管活性物質(zhì)，參與血管壁損傷的修復(fù)，并能在生長(zhǎng)因子刺激下發(fā)生分裂和增殖

3、。因此VSMCs的表型轉(zhuǎn)化是VSMCs增殖、遷移進(jìn)而形成動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。血清饑餓法可以誘導(dǎo)人血管平滑肌細(xì)胞再分化。分化表型的VSMCs 受血清應(yīng)答因子(Serum response factor, SRF)及其輔因子(Myocardin-related transcriptionAlfactor, MRTF)的調(diào)控，SRF是公認(rèn)的調(diào)控VSMCs表型轉(zhuǎn)化的核轉(zhuǎn)錄因子，它通過(guò)與 CArGbox的結(jié)合，促進(jìn)標(biāo)志性基因表達(dá)而發(fā)揮

4、生理功能。
　　 vsMCs 屬于具有增殖潛能的細(xì)胞，它由分化型轉(zhuǎn)變?yōu)槿シ只途褪瞧湓鲋车那疤?。那么，Geminin是否參與此類(lèi)細(xì)胞增殖-分化調(diào)控？SRF是公認(rèn)的參與VSMCs表型標(biāo)志物調(diào)控的核轉(zhuǎn)錄因子，Geminin是否與SRF 有關(guān)？是協(xié)同作用還是拮抗關(guān)系呢？結(jié)合既往的研究成果，我們推測(cè)：Geminin基因參與VSMCs表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控，而這種作用的發(fā)揮可能與影響SRF 轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)有關(guān)。
　　 二、研究目的
　

5、　 主要從分子水平檢測(cè)細(xì)胞在不同條件下其表型標(biāo)志物與Geminin 之間的關(guān)系，并探討Geminin 參與細(xì)胞表型調(diào)控機(jī)制可能系影響SRF表達(dá)所致。
　　 三、研究方法
　　 1．采用形態(tài)學(xué)及免疫組化方法鑒定血管平滑肌細(xì)胞。
　　 2．通過(guò)血清刺激誘導(dǎo)細(xì)胞不同表型，檢測(cè)不同表型細(xì)胞生物學(xué)功能差異。
　　 3．用Western blot及RT-PCR 檢測(cè)VSMCs表型標(biāo)志物及Geminin的表達(dá)變化情況

6、。
　　 4．通過(guò)阻斷Geminin基因，觀察細(xì)胞形態(tài)、表型標(biāo)志物及SRF表達(dá)的變化。
　　 四、研究結(jié)果
　　 1、血清刺激VSMCs：細(xì)胞表型由收縮型向合成型轉(zhuǎn)化；Geminin mRNA及蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng)。Geminin在血清刺激VSMCs表型轉(zhuǎn)變中，存在基因和蛋白的高表達(dá)，證明Geminin與血清刺激所致VSMCs表型轉(zhuǎn)變有關(guān)。
　　 2、通過(guò)RNAi，致使Geminin基因及蛋白表達(dá)下調(diào)，VSM

7、Cs 形態(tài)改變，細(xì)胞分化標(biāo)志物表達(dá)下降，去分化標(biāo)志物增加，進(jìn)一步證明Geminin 參與了VSMCs表型轉(zhuǎn)變的調(diào)控。
　　 3、RNAi 阻斷Geminin表達(dá)后，Geminin 核定位差異及SRF表達(dá)出現(xiàn)相應(yīng)改變，提示Geminin對(duì)VSMCs表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控作用可能是通過(guò)影響SRF表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。
　　 五、結(jié)論
　　 Geminin 參與了VSMCs表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控，可能通過(guò)影響SRF表達(dá)實(shí)現(xiàn)。對(duì)Geminin的干