HMGB1的聚ADP-核糖基化修飾促進(jìn)其乙?；揎?pdf

1、目的:高遷移率族蛋白1(HMGB1)作為重要的晚期炎癥介質(zhì)在炎癥(包括SAP)的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用,HMGB1在翻譯后修飾包括乙?；?、磷酸化、甲基化和ADP-核糖基化。HMGB1主動(dòng)分泌過(guò)程中,乙?；揎棸缪萘撕苤匾慕巧?促進(jìn)HMGB1向胞漿移位和細(xì)胞外分泌。近年的研究發(fā)現(xiàn)PARP-1參與了炎癥過(guò)程的HMGB1核內(nèi)定位和向細(xì)胞外分泌的過(guò)程,可能與HMGB1的ADP-核糖基化修飾有關(guān)。本研究旨在研究HMGB1的聚ADP-核糖基化修飾

2、及其對(duì)乙?；揎椀挠绊?探討PARP-1調(diào)控HMGB1細(xì)胞內(nèi)定位和細(xì)胞外分泌的可能機(jī)制,為PARP-1抑制劑在臨床上用于抗HMGB1相關(guān)炎癥的治療提供更多的理論依據(jù)。
　　方法:以LPS(100ng/ml)、LPS+3-AB(10mmol/l)刺激RAW264.7細(xì)胞2h和4h,用RIPA裂解法提取出細(xì)胞全蛋白;用HMGB1抗體進(jìn)行免疫沉淀富集HMGB1;用PAR抗體、乙酰化-賴氨酸抗體進(jìn)行Western-blot檢測(cè)HMGB1的

3、聚ADP-核糖基化和乙酰化水平。體外構(gòu)PARP-1以6-生物素-17-NAD為底物對(duì)HMGB1進(jìn)行聚ADP-核糖基化,用HRP標(biāo)記的鏈霉親和素抗體進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)生物素化-ADP核糖;體外CBP以乙酰輔酶A為底物對(duì)HMGB1進(jìn)行進(jìn)一步的的乙酰化,用乙?；?賴氨酸抗體進(jìn)行Western-blot檢測(cè)蛋白的繼續(xù)乙?；?。
　　結(jié)果:單用LPS刺激RAW264.7細(xì)胞活化PARP-1后,HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明顯高于對(duì)照組

4、(0h),乙?；揭裁黠@高于對(duì)照組;同時(shí)以(PARP-1活性抑制劑)3-AB刺激以后,HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明顯低于LPS組,乙?；揭裁黠@低于LPS組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。體外HMGB1在PARP-1作用下進(jìn)行聚ADP-核糖基反應(yīng)后,結(jié)果顯示PARR-1組HMGB1的聚ADP-核糖基化水平明顯高于control組(PARR-1熱滅活對(duì)照組),繼續(xù)乙?；揭裁黠@高于control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(