苯并芘致癌過程中ADP-核糖基化對組蛋白表達的影響.pdf

1、目的：
　　苯并芘（Benzo(a)pyrene，BaP）是目前最為明確的致肺癌化合物，但其致癌分子機制尚未完全闡明。大量文獻報道組蛋白的ADP-核糖基化與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，從組蛋白ADP-核糖基化著手開展BaP致癌作用機理的研究，對于揭示BaP致癌機制具有非常重要的戰(zhàn)略性意義。因此，本研究擬通過分析組蛋白ADP-核糖基化修飾在BaP誘導(dǎo)細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中的作用，檢測和分析BaP作用相關(guān)的組蛋白ADP-核糖基化修飾模式，明確ADP

2、-核糖基化在BaP致癌過程中對組蛋白的影響，從而為化學(xué)致癌的防治提供新思路。
　　方法：
　　首先選取課題組前期構(gòu)建的BaP誘導(dǎo)的人支氣管上皮細胞（16HBE細胞）惡性轉(zhuǎn)化模型和同樣處理的聚-ADP-核糖水解酶（PARG）缺陷的細胞株（shPARG細胞）作為研究對象（處理過程：使用40μmol/L的BaP染毒處理16HBE細胞和 PARG缺陷細胞15w），借助透射電子顯微鏡觀察比較兩種細胞惡性轉(zhuǎn)化后細胞間期染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化，

3、分析BaP誘導(dǎo)細胞轉(zhuǎn)化過程中ADP-核糖基化對組蛋白的可能影響；進一步采用Western blot技術(shù)和免疫熒光技術(shù)，篩選并鑒定出BaP作用相關(guān)的特異性ADP-核糖基化修飾的組蛋白，探討B(tài)aP致癌相關(guān)的組蛋白 ADP-核糖基化修飾模式；最終通過免疫共沉淀技術(shù)分析組蛋白與 ADP-核糖間的相互作用，從而明確組蛋白ADP-核糖基化在BaP致癌過程中的可能作用機制。
　　結(jié)果：
　　在BaP誘導(dǎo)處理細胞15w后，16HBE細胞內(nèi)出

4、現(xiàn)核異常，伴有轉(zhuǎn)錄活性高的常染色質(zhì)減少、轉(zhuǎn)錄活性很低的異染色質(zhì)增多，而shPARG細胞內(nèi)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變不明顯；Western blot和細胞免疫熒光實驗結(jié)果表明BaP染毒處理細胞15w后，16HBE細胞內(nèi)的組蛋白H2A表達明顯降低、組蛋白H2B表達顯著升高，而shPARG細胞內(nèi)組蛋白H2A和H2B的表達變化不明顯，組蛋白H3和H4在兩種細胞內(nèi)的表達均未見明顯改變；進一步使用免疫共沉淀分析結(jié)果發(fā)現(xiàn) H2A可發(fā)生ADP-核糖基化修飾，H2A