苯并芘致癌過程中ADP-核糖基化對(duì)組蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　苯并芘（Benzo(a)pyrene，BaP）是目前最為明確的致肺癌化合物，但其致癌分子機(jī)制尚未完全闡明。大量文獻(xiàn)報(bào)道組蛋白的ADP-核糖基化與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，從組蛋白ADP-核糖基化著手開展BaP致癌作用機(jī)理的研究，對(duì)于揭示BaP致癌機(jī)制具有非常重要的戰(zhàn)略性意義。因此，本研究擬通過分析組蛋白ADP-核糖基化修飾在BaP誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中的作用，檢測(cè)和分析BaP作用相關(guān)的組蛋白ADP-核糖基化修飾模式，明確ADP

2、-核糖基化在BaP致癌過程中對(duì)組蛋白的影響，從而為化學(xué)致癌的防治提供新思路。
　　方法：
　　首先選取課題組前期構(gòu)建的BaP誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE細(xì)胞）惡性轉(zhuǎn)化模型和同樣處理的聚-ADP-核糖水解酶（PARG）缺陷的細(xì)胞株（shPARG細(xì)胞）作為研究對(duì)象（處理過程：使用40μmol/L的BaP染毒處理16HBE細(xì)胞和 PARG缺陷細(xì)胞15w），借助透射電子顯微鏡觀察比較兩種細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化后細(xì)胞間期染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化，

3、分析BaP誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中ADP-核糖基化對(duì)組蛋白的可能影響；進(jìn)一步采用Western blot技術(shù)和免疫熒光技術(shù)，篩選并鑒定出BaP作用相關(guān)的特異性ADP-核糖基化修飾的組蛋白，探討B(tài)aP致癌相關(guān)的組蛋白 ADP-核糖基化修飾模式；最終通過免疫共沉淀技術(shù)分析組蛋白與 ADP-核糖間的相互作用，從而明確組蛋白ADP-核糖基化在BaP致癌過程中的可能作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　在BaP誘導(dǎo)處理細(xì)胞15w后，16HBE細(xì)胞內(nèi)出

4、現(xiàn)核異常，伴有轉(zhuǎn)錄活性高的常染色質(zhì)減少、轉(zhuǎn)錄活性很低的異染色質(zhì)增多，而shPARG細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變不明顯；Western blot和細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BaP染毒處理細(xì)胞15w后，16HBE細(xì)胞內(nèi)的組蛋白H2A表達(dá)明顯降低、組蛋白H2B表達(dá)顯著升高，而shPARG細(xì)胞內(nèi)組蛋白H2A和H2B的表達(dá)變化不明顯，組蛋白H3和H4在兩種細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)均未見明顯改變；進(jìn)一步使用免疫共沉淀分析結(jié)果發(fā)現(xiàn) H2A可發(fā)生ADP-核糖基化修飾，H2A