高壓脈沖電場(chǎng)對(duì)β-乳球蛋白結(jié)構(gòu)、免疫特性和糖基化特性的影響.pdf

1、本文采用光譜學(xué)方法，研究高壓脈沖電場(chǎng)（pulsed electric fields，PEF）預(yù)處理和糖基化反應(yīng)對(duì)β-乳球蛋白（β-lactoglobulin，β-Lg）的結(jié)構(gòu)和功能性質(zhì)進(jìn)行研究。采用高分辨率Orbitrap Fusion質(zhì)譜分析PEF預(yù)處理對(duì)β-Lg糖基化位點(diǎn)的影響。通過間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA分析復(fù)合改性后β-Lg的抗原性和IgE結(jié)合能力的變化，結(jié)果表明：
　　1.采用不同電場(chǎng)強(qiáng)度（5、15、25、35kV/cm）的P

2、EF結(jié)合糖基化處理β-Lg，通過間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法對(duì)PEF結(jié)合糖基化處理前后的β-Lg的抗原性、IgE結(jié)合能力進(jìn)行研究。PEF結(jié)合糖基化處理會(huì)使β-Lg的抗原性和IgE結(jié)合能力均有一定程度降低。其中，PEF預(yù)處理會(huì)促進(jìn)β-Lg抗原性降低。隨著電場(chǎng)強(qiáng)度的增大，β-Lg抗原性降低程度呈先增大后減小的趨勢(shì)，在電場(chǎng)強(qiáng)度25 kV/cm處理90μs時(shí)抗原性降低程度最大，降低了72.9％。β-Lg的IgE結(jié)合能力呈先降低后升高的趨勢(shì)，在電場(chǎng)強(qiáng)度1

3、5 kV/cm下預(yù)處理90μs時(shí)IgE結(jié)合能力達(dá)到最小，隨著場(chǎng)強(qiáng)的進(jìn)一步增大，IgE結(jié)合能力增加且呈穩(wěn)定趨勢(shì)。
　　2.采用SDS-PAGE凝膠電泳、圓二色譜分析、內(nèi)源性熒光和表面疏水性等對(duì)PEF結(jié)合糖基化處理前后的β-Lg的結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)定。PEF結(jié)合糖基化處理會(huì)使β-Lg的結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著變化，自由氨基含量顯著降低；分子量增大，且在分子量31.0kDa-43.0kDa產(chǎn)生了新的電泳條帶，說明在加熱過程中形成了共價(jià)二聚體結(jié)構(gòu)；圓二色譜測(cè)

4、定二級(jí)結(jié)構(gòu)各組分含量，α-螺旋結(jié)構(gòu)含量降低，β-折疊結(jié)構(gòu)含量升高，β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)含量降低，同時(shí)無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)逐漸增多；內(nèi)源熒光強(qiáng)度顯著降低；表面疏水性顯著降低,并且隨脈沖場(chǎng)強(qiáng)的增大呈先升高后下降的趨勢(shì)。
　　3.采用高分辨率質(zhì)譜（Mass spectrometry）對(duì)PEF處理前后的β-Lg的糖基化位點(diǎn)進(jìn)行鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)25kv/cm的PEF預(yù)處理后，增加了一個(gè)糖基化位點(diǎn)。說明PEF預(yù)處理改變了β-Lg的空間結(jié)構(gòu)。
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