GOLPH2的糖基化修飾對于其參與肝癌發(fā)生的影響.pdf

1、目的：
　　本研究通過轉染GOLPH2及其糖基化缺失的重組質粒進入肝癌細胞HepG2,進行體外功能學研究(細胞生長與細胞周期)，探索GOLPH2的糖基化修飾對肝癌細胞的炎癥通路及膽固醇代謝通路的影響，從而揭示GOLPH2的糖基化修飾對于其功能發(fā)揮的影響。
　　方法：
　　構建GOLPH2的109、144位糖基化位點雙突變質粒，并命名為pcDNA3-Flag-GOLPH2(DM)，用脂質體分別轉染GOLPH2 WT(野生

2、型GOLPH2重組質粒)或者DM到肝癌細胞HepG2中，進行細胞生長與細胞周期實驗、NF-κB報告基因實驗、炎癥小體及脂筏的免疫熒光染色實驗。
　　結果：
　　細胞生長與細胞周期實驗表明，與野生型GOLPH2相比，糖基化位點突變GOLPH2會使細胞生長與細胞周期減慢。雙熒光素酶報告基因實驗結果表明，野生型GOLPH2能夠激活HepG2細胞中NF-κB的轉錄活性，而雙糖基化位點突變會使GOLPH2失去此激活作用。免疫熒光實驗檢