初診鼻咽癌中醫(yī)辨證分型與VEGF及EBV-DNA相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景與目的： 鼻咽癌(NPC)患者容易發(fā)生復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，EB病毒與NPC的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，通過檢測(cè)鼻咽癌血漿中EBV—DNA的表達(dá)水平，能夠早期檢測(cè)病灶殘留、復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，準(zhǔn)確評(píng)價(jià)放化療敏感性及判斷預(yù)后。微血管形成與腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是調(diào)節(jié)血管生成的最重要的因子之一，VEGF及其受體存在于多種腫瘤

2、中，在多種腫瘤中存在不同程度的表達(dá)，在病理性腫瘤血管新生中起著重要的作用。 本課題將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)最新檢測(cè)手段及腫瘤血管生成理論與中醫(yī)的辨證分型相結(jié)合，通過熒光定量PCR方法檢測(cè)鼻咽癌患者血漿EBV—DNA濃度，通過酶聯(lián)免疫法(enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA)、免疫組化法分別檢測(cè)了VEGF在鼻咽癌患者血清、腫瘤組織的表達(dá)情況，觀察EBV—DNA濃度及VEGF與中醫(yī)證型的關(guān)系，從而探討三者

3、與預(yù)后的相關(guān)性，為NPC初診辨證分型判斷預(yù)后、篩選高危復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病人，指導(dǎo)前期預(yù)防治療提供理論依據(jù)。 研究材料和方法： 1.選擇初診且無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移共94例NPC患者進(jìn)入本研究，按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行中醫(yī)辨證分型：①肺熱型；②痰凝型；③血瘀型；④血瘀痰凝型；⑤氣血兩虛型。分析T分期、N分期及TNM分期與中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性。 2.收集上述患者的血清標(biāo)本，其中包括治療前94份，治療后22份；另抽取30例體檢健康成人的血清標(biāo)本作為對(duì)

4、照。應(yīng)用ELISA法檢測(cè)患者及健康者的血清VEGF濃度(sVEGF)。分析治療前血清VEGF濃度與中醫(yī)辨證分型及臨床特征的相關(guān)性，并比較治療前后血清VEGF濃度的變化。 3.收集上述患者的鼻咽腫瘤組織標(biāo)本94例，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)了VEGF在腫瘤組織中的表達(dá)情況。分析NPC腫瘤組織VEGF表達(dá)與中醫(yī)辨證分型、臨床特征及血清VEGF濃度的相關(guān)性。 4.入組的94名患者中有91例抽取到治療前血標(biāo)本，48例抽取到治療后血標(biāo)本。

5、應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測(cè)鼻咽癌患者血漿EBV—DNA濃度。分析治療前血漿EBV—DNA濃度與中醫(yī)辨證分型、臨床特征、血清VEGF濃度及腫瘤組織VEGF表達(dá)的相關(guān)性，并比較治療前后血漿EBV—DNA濃度的變化。 5.用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果： 1.初診鼻咽癌中醫(yī)辨證分型與TNM分期的相關(guān)性 94例患者按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行中醫(yī)辨證分型，其中最多為痰凝型(45例)，其次為肺熱型(23例)，血瘀

6、型及血瘀痰凝型相對(duì)少見(分別為15例及11例)，未收集到氣血兩虛型患者。痰凝型、瘀血型Ⅲ期、Ⅳ期所占比率較多，分別為91.1％、93.3％，兩者比較無顯著差異(P=1.0)；血瘀痰凝型全為Ⅲ期、Ⅳ期(100％)，肺熱型Ⅲ期、Ⅳ期所占比率較少，與非肺熱型比較有顯著差異(P<0.001)。肺熱型、痰凝型T3、T4期所占比率較少，兩者無顯著差異(X2=2.859，P=0.091)，而瘀血型、血瘀痰凝型T3、T4期較多，兩者無顯著差異；肺熱型+

7、痰凝型組與血瘀型+痰凝血瘀型組T3、T4期比較，兩者有顯著差異(X2=8.389，P=0.004)。痰凝型、血瘀型、痰凝血瘀型N2、N3期所占比率較多，三者比較無顯著差異(X2=1.816，P=0.403)，肺熱型23例全部集中在N0、N1期。 2.初診鼻咽癌血清VEGF濃度及與中醫(yī)辨證分型的關(guān)系 94例NPC患者治療前sVEGF為428.36±615.87pg/ml，高于健康對(duì)照組(226.04±167.78pg/ml

8、)(P<0.05)，22例患者治療后 sVEGF(171.75±122.64pg/ml)低于治療前水平(485.13±637.56 pg/ml)(P<0.05)，而與相應(yīng)正常對(duì)照值相比則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.205)。不同中醫(yī)辨證分型之間sVEGF濃度比較，痰凝型最高(530.10±812.26 pg/ml)，肺熱型最低(261.27±126.56pg/ml)，采用單向方差分析(One—way ANOVA)，四種中醫(yī)辨證分型之間sVEG

9、F濃度無顯著差異(P=0.112，0.167)。治療前sVEGF濃度與性別、年齡、T分期、N分期、TNM分期無相關(guān)性(P>0.05)。 3.初診鼻咽癌腫瘤組織VEGF表達(dá)及與中醫(yī)辨證分型的關(guān)系 NPC患者腫瘤組織VEGF的表達(dá)與患者的年齡、性別、T分期、N分期、TNM分期及中醫(yī)辨證分型均無相關(guān)性(P>0.05)；VEGF表達(dá)陰性與陽性組之間患者的sVEGF相比較，無顯著差異(P=0.416)；VEGF低表達(dá)與高表達(dá)組患

10、者的sVEGF亦無顯著差異(P=0.121)。 4.初診鼻咽癌EBV—DNA濃度及與中醫(yī)辨證分型的關(guān)系 T分期、N分期、TNM分期高者EBV—DNA濃度也較高(P值分別為0.04、0.008、<0.001)，不同性別、年齡組間EBV—DNA濃度無顯著差異；不同辨證類型間EBV—DNA濃度有顯著差異(X2=15.653，P=0.001)，痰凝型EBV—DNA濃度最高，肺熱型最低；sVEGF低表達(dá)與高表達(dá)組患者的EBV—D

11、NA濃度無顯著差異(p=0.773)；組織VEGF表達(dá)陰性與陽性組之間EBV—DNA濃度無顯著差異(P=0.662)，組織VEGF弱表達(dá)較高表達(dá)者EBV—DNA濃度高(P<0.05)；治療后EBV—DNA濃度較治療前顯著下降(P<0.001)。 結(jié)論： 1.鼻咽癌中醫(yī)辨證分型以痰凝型最為常見，其次為肺熱型，氣血虧虛型最少見。 2.中醫(yī)辨證分型與臨床TNM分期的關(guān)系密切，隨著其TNM分期的分級(jí)增加，其證型亦呈現(xiàn)“肺

12、熱型→痰凝型或血瘀型→血瘀痰凝型”總的演變趨勢(shì)；血瘀型及痰凝血瘀型具有較高T分期，痰凝型及血瘀痰凝型較多見頸部淋巴結(jié)腫大。 3.NPC患者治療前sVEGF濃度高于正常人群，通過有效治療，sVEGF濃度可顯著降低至正常或接近正常水平。 4.sVEGF濃度及腫瘤組織VEGF的表達(dá)與T分期、N分期、TNM分期及中醫(yī)辨證分型均無相關(guān)。 5.NPC患者治療前EBV—DNA濃度與血清及組織VEGF表達(dá)均無相關(guān)。 6.