環(huán)孢菌素A聯(lián)合苦參堿逆轉(zhuǎn)K562-ADM細(xì)胞多藥耐藥的研究及微流控芯片檢測(cè)藥物外排的應(yīng)用.pdf

1、目的：本課題旨在研究環(huán)孢菌素A(CsA)及苦參堿(MAT)單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人慢性粒細(xì)胞白血病急性紅白血病變細(xì)胞株K562及其耐阿霉素(ADM)細(xì)胞株K562/ADM糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)表達(dá)的影響，以探討它們逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(MDR)的作用機(jī)理，為環(huán)孢菌素A和苦參堿作為耐藥逆轉(zhuǎn)劑的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。并探討微流控芯片在檢測(cè)白血病耐藥細(xì)胞株藥物外排功能中的應(yīng)用前景，為臨床逆轉(zhuǎn)MDR的藥物篩選提供新的策略和方法。

2、 方法：實(shí)驗(yàn)組分為下列幾組：(1)K562/S敏感細(xì)胞組：(2)K562/ADM耐藥細(xì)胞組；(3)K562/ADM+CsA組；(4)K562/ADM+MAT組；(5)K56Z/ADM+CsA+MAT組。MTT法測(cè)定逆轉(zhuǎn)劑環(huán)孢菌素A或/和苦參堿的細(xì)胞毒性及藥物作用后的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡百分率的變化，以評(píng)價(jià)環(huán)孢菌素A、苦參堿單獨(dú)及聯(lián)合與阿霉素共同作用情況下對(duì)K562/ADM阿霉素耐藥的逆轉(zhuǎn)效果。熒光分光光度法、流式細(xì)胞儀(

3、FCM)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)藥物(ADM)濃度的改變，微流控芯片檢測(cè)白血病耐藥細(xì)胞株藥物外排。免疫組化法檢測(cè)MDR-1基因編碼的P-gp表達(dá)變化，流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)P-gp變化，以探討環(huán)孢菌素A及苦參堿逆轉(zhuǎn)MDR機(jī)制與P-gp介導(dǎo)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)能力改變之間的關(guān)系。 結(jié)果：1.環(huán)孢菌素A和苦參堿對(duì)K562/5及K562/ADM均有明顯的抑制作用，且IC50接近，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。非細(xì)胞毒性劑量的兩藥聯(lián)合應(yīng)用后未出現(xiàn)毒性疊加，以環(huán)孢菌

4、素A及苦參堿對(duì)K562/ADM細(xì)胞的非細(xì)胞毒性劑量作為最佳的逆轉(zhuǎn)濃度；2.在與ADM合用時(shí)，K562/ADM+CsA組及K562/ADM+MAT組的IC50均低于K562/ADM耐藥組(P<0.01)，但高于K562/ADM+CsA+MAT組(P<0.01)，二藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)逆轉(zhuǎn)倍數(shù)大于兩者單獨(dú)作用之和。與Annexin v-FITC流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的細(xì)胞凋亡百分率增加是一致的；3.K562/ADM+CsA組、K562/ADM+MAT組和K

5、562/ADM+CsA+MAT組，細(xì)胞內(nèi)ADM濃度明顯增加，與K562/ADM對(duì)照組間有顯著性差異(P<0.01)。微流控芯片檢測(cè)結(jié)果和FCM法的結(jié)果基本一致；4.免疫組化法的結(jié)果顯示，與K562/S比較，K562/ADM細(xì)胞中P-gp呈高表達(dá)；5.與K562/ADM耐藥組比較，K562/ADM+MAT組P-gp表達(dá)量降低(P<0.01)，而K562/ADM+CsA組P-gp表達(dá)量無(wú)明顯變化(P>0.05)，但兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)作用大于兩者

6、單獨(dú)作用之和。 結(jié)論：1.環(huán)孢菌素A和苦參堿均是有效的抗腫瘤藥，且K562/ADM對(duì)其不具耐藥性，非細(xì)胞毒性劑量的兩藥聯(lián)合時(shí)無(wú)毒性的疊加；2.非細(xì)胞毒性劑量的環(huán)孢菌素A和苦參堿均可部分逆轉(zhuǎn)有多藥耐藥表型的細(xì)胞株K562/ADM對(duì)阿霉素的耐藥性，二者聯(lián)合應(yīng)用效果優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用，具有協(xié)同作用；3.微流控芯片檢測(cè)白血病耐藥細(xì)胞株藥物外排的方法具有一定可行性，在MDR逆轉(zhuǎn)藥物的篩選和腫瘤個(gè)體化治療方面有良好的應(yīng)用前景；4.K562/ADM