版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:
烏蘇烷三萜類化合物3β,19α-二羥基烏蘇-12-烯-23,28-二羧酸( Rotundioic acid, RA)是從山綠茶提取的一種烏蘇酸的衍生物,本實驗觀察RA對人紅白血病K562細胞增殖和凋亡的影響,并探討其機制;研究RA對耐阿霉素的K562細胞(K562/ADM細胞)增殖活性及抗腫瘤藥物敏感性的影響,并探討RA對K562/ADM細胞多藥耐藥作用的影響及機制,進一步探討RA在白血病的發(fā)生、發(fā)展及耐藥之間的關聯(lián),
2、RA有望成為治療白血病的藥物。
方法:
采用體外細胞培養(yǎng)技術,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測RA對K562細胞及K562/ADM細胞的增殖抑制作用及抗腫瘤藥物敏感性的影響;流式細胞儀用Annexin V-FITC/PI雙染色法研究RA對K562細胞凋亡的作用;實時定量PCR(Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)和western blot分別在mRNA和蛋
3、白水平對K562細胞中PARP、Bcl-2、Bax、NF-кB p65、caspase-3的表達進行檢測;RT-qPCR和western blot檢測K562細胞和K562/ADM細胞MDR1 mRNA和蛋白水平,并檢測非細胞毒性濃度RA對K562/ADM細胞MDR1 mRNA及P-gp表達的影響;Western blot檢測K562/ADM細胞p-JNK、p-p38、p-ERK1/2的表達。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用GraphPad Prism
4、6和SPSS18.0軟件,兩組間比較采用獨立樣本t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,用x±s表示,P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
結果:
RA抑制K562細胞的增殖,呈濃度和時間依賴性,在30μg/ml時增殖抑制作用最明顯,24h的IC50為14.94μg/ml;Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測顯示RA誘導K562細胞凋亡,呈濃度和時間依賴性,與對照組比較,總凋亡率在高濃度組表現(xiàn)出明顯差異(P<
5、0.01)。RT-qPCR和western blot顯示:RA上調(diào)K562細胞Bax、caspase-3、PARP的mRNA和蛋白表達水平,同時降低Bcl-2、NF-кB p65的轉錄和翻譯水平。
CCK-8結果顯示RA抑制K562/ADM細胞增殖,呈濃度和時間依賴性;K562/ADM細胞對RA的24h IC50為45.14μg/ml,24h IC10為6.392μg/ml,取4μg/ml為后續(xù)實驗濃度;RA增加K562/AD
6、M細胞對阿霉素的敏感性,逆轉倍數(shù)為1.61倍,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),對K562細胞無明顯增敏作用;K562/ADM對ADM的耐藥倍數(shù)為41.76倍。
RT-qPCR和western blot顯示:K562細胞內(nèi)MDR1 mRNA表達極低水平,其蛋白產(chǎn)物P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)幾乎不表達;K562/ADM細胞MDR1 mRNA及P-gp高度表達;且RA下調(diào)K562/ADM細胞MDR1的表
7、達水平。Western blot檢測發(fā)現(xiàn):RA上調(diào)K562/ADM細胞p38、ERK1/2的磷酸化水平,不影響p-JNK的表達,提示RA可能通過調(diào)節(jié)MAPK信號通路調(diào)控MDR1的轉錄和翻譯水平參與逆轉白血病多藥耐藥作用。
結論:
RA對K562細胞起增殖抑制及促凋亡作用,呈濃度和時間依賴性,其作用可能與上調(diào)促凋亡基因(PARP、caspase-3、Bax)的表達及下調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達相關,另外可能與降低NF
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 三羥異黃酮誘導K562和K562-ADM細胞的凋亡作用.pdf
- 槲皮素體外逆轉K562-ADM細胞耐藥的研究.pdf
- 環(huán)孢素A聯(lián)合三氧化二砷對K562-ADM細胞的逆轉耐藥作用.pdf
- GP-7對K562及K562-ADM細胞抑制作用的實驗研究.pdf
- 中藥提取物逆轉K562-ADM細胞的耐藥作用及其機制的初步探討.pdf
- 吖啶酮類化合物LZY13逆轉人白血病K562-ADM細胞多藥耐藥作用及機制研究.pdf
- LTD4對K562細胞增殖和凋亡的影響.pdf
- 金釵石斛多糖對K562細胞增殖和凋亡的影響.pdf
- 佛波酯類化合物聯(lián)合抗白血病藥物對K562細胞的影響.pdf
- 金線蓮中甾醇和三萜類化合物提取分析及其抑制人慢性白血病粒細胞K562活性研究.pdf
- 化合物T20對P-gp介導的K562-ADM細胞阿霉素耐藥性的逆轉作用.pdf
- RNA干擾技術逆轉白血病K562-ADM細胞的耐藥性及其機制研究.pdf
- 間充質(zhì)干細胞對K562細胞增殖與凋亡的影響.pdf
- PKF118-310對K562細胞增殖和凋亡的影響及其機制研究.pdf
- Livin siRNA重組腺病毒的構建及其對K562細胞增殖、凋亡及耐藥的影響.pdf
- 大黃素甲醚逆轉白血病耐藥細胞系K562-ADM耐藥性的研究.pdf
- Puerarin對K562、K562-AO2的增殖抑制和耐藥逆轉作用及分子機制.pdf
- 誘導耐藥K562-ADM和轉基因耐藥K562-MDR細胞株的生物學行為和耐藥機制的比較研究.pdf
- 參芪扶正液逆轉多藥耐藥細胞株K562-ADM耐藥性研究.pdf
- 模擬微重力對K562細胞增殖的影響.pdf
評論
0/150
提交評論