金線蓮中甾醇和三萜類化合物提取分析及其抑制人慢性白血病粒細(xì)胞K562活性研究.pdf

1、目的：本論文以CO<,2>超臨界流體萃取法提取珍稀藥材金線蓮中甾醇類和萜類化合物，并對上述兩類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量；初步對中藥材金線蓮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，為完善中藥材金線蓮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可參考的數(shù)據(jù)資料；對金線蓮CO<,2>超臨界流體萃取產(chǎn)物的抑制人白血病粒細(xì)胞K562增殖活性進(jìn)行研究，并初步探討其抗腫瘤活性的機(jī)理?！　》椒ǎ簯?yīng)用CO<,2>超臨界流體萃取金線蓮中的甾醇和三萜類物質(zhì)，采用L<,9>(3)M<'3>正交試驗設(shè)計，以甾醇類

2、及三萜物質(zhì)萃取率為指標(biāo)，考察萃取壓力、萃取溫度及夾帶劑對萃取率的影響；并應(yīng)用HPLC-APCI-MS聯(lián)用技術(shù)，對提取的甾醇物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析；三萜類物質(zhì)應(yīng)用HPLC-APCI-MS聯(lián)用技術(shù)定性鑒別，采用選擇監(jiān)測離子(selected ion monitoring，SIM)方法進(jìn)行定量；以齊墩果酸和熊果酸為指標(biāo)性成分，通過測定了12批藥材，對兩種物質(zhì)的最低含量進(jìn)行規(guī)定，按2005年版《中國藥典》附錄IX H水分測定法第一法、附錄IX

3、K灰分測定法、附錄XA浸出物測定法對中藥材金線蓮的水分、總狄分和醇溶性浸出物等進(jìn)行了測定并規(guī)定了限度；以金線蓮的CO<,2>超臨界流體萃取產(chǎn)物(SFE<,0>)為研究對象，應(yīng)用MTT法檢測SFE<,0>寸人白血病粒細(xì)胞K562的細(xì)胞毒作用，通過抑制率曲線計算IC<,50>，透射電鏡、AO-EB熒光雙染色法觀察SFE<,0>對K562細(xì)胞促凋亡形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期改變等?！　〗Y(jié)果：CO<,2>超臨界流體萃取最佳萃取條件是壓

4、力25Mpa、溫度55℃，夾帶劑EtOH；測得CO<,2>超臨界流體萃取產(chǎn)物中麥角甾醇，豆甾醇和β-谷甾醇含量分別是索氏提取產(chǎn)物中3種甾醇含量的3.95，3.97和4.71倍。用APCI(+)電離源，根據(jù)生成(M+H)<'+>準(zhǔn)分子離子峰、二級質(zhì)譜的特征碎片離子峰、保留時間、對照品質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)會線蓮中含有谷甾醇，豆甾醇，首次確定金線蓮中含有麥角甾醇、齊墩果酸和熊果酸；金線蓮中麥角甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、齊墩果酸和熊果酸的

5、含量分別為0.968mg/g、1.19 mg/g、1.06 mg/g、0.161 mg/g和0.130 mg/g。12批野生金線蓮藥材中齊墩果酸和熊果酸的最低含量分別為0.065％和0.059％，水分、總灰分和醇溶性浸出物的范圍分別為10.47％～7.32％，11.049％～7.444％和18.127％～10.274％。SFE<,0>顯著殺傷體外培養(yǎng)人慢性白血病粒細(xì)胞K562，IC<,50>值為11.1μ g/mL，K562經(jīng)SFE<,