mIL-12雙亞基共表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及在體內(nèi)外的表達(dá).pdf

1、白細(xì)胞介素12(IL-12)是由B細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞分泌的一種異二聚體細(xì)胞因了.研究表明,IL-12能促進(jìn)NK細(xì)胞和T細(xì)胞的增殖、活化及細(xì)胞毒作用;促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化和多種細(xì)胞因子產(chǎn)生;調(diào)節(jié)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化發(fā)育,增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能.上述生物學(xué)功能提示,IL-12在抗腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用.這在多種腫瘤包括B16F10黑色素瘤、Renca腎細(xì)胞癌、Lewis肉瘤等模型中已得到證實(shí).然而,體內(nèi)直接注射IL-12蛋白所

2、致的毒副作用限制了其臨床應(yīng)用.自Wolff等(1990年)提出基因治療的新方法——裸DNA(nakedDNA)直接注射以來,為解決該問題提供了新思路.質(zhì)粒DNA注入體內(nèi)可在局部細(xì)胞表達(dá)分泌,使局部組織積聚高濃度的IL-12,改善腫瘤的微環(huán)境,激發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答,且血清中的IL-12較低,避免全身性的毒副作用.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?利用雙CMV啟動(dòng)子構(gòu)建小鼠IL-12(mIL-12)雙亞基共表達(dá)的真核表達(dá)質(zhì)粒pCmIL-12.并將pCmIL-12在體

3、內(nèi)外進(jìn)行表達(dá),觀察其在體外能否表達(dá)有生物學(xué)活性的mIL-12以及體內(nèi)增強(qiáng)NK細(xì)胞活性的潛能,為進(jìn)行mIL-12腫瘤基因治療研究奠定基礎(chǔ).實(shí)驗(yàn)結(jié)論: 1、研究人員構(gòu)建的pCmIL-12質(zhì)粒在體外能夠表達(dá)mIL-12,而且作用強(qiáng)于pC35和pC40同時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)上清.2、pCmIL-12質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)表達(dá)后亦能顯著增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性,而且其活性高于體外的表達(dá)上清.pC35和pC40在體內(nèi)卻不能表達(dá)有活性的IL-12.3、pCmIL-12