mIL-12基因轉(zhuǎn)染抑制裸鼠肝癌血管生成的研究.pdf

1、　　目的：研究腺病毒介導(dǎo)的小鼠白細胞介素—12基因在體外對肝癌H22細胞生長的影響,以及在裸鼠體內(nèi)對肝癌血管生成的抑制。
　　方法：(1)構(gòu)建攜帶鼠白細胞介素—12基因的重組腺病毒,在體外轉(zhuǎn)染H22細胞,熒光顯微鏡觀測轉(zhuǎn)染率,ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中的鼠白細胞介素—12含量。(2)應(yīng)用倒置顯微鏡、細胞計數(shù)法、改良MTT法、流式細胞儀觀察重組腺病毒在體外對H22細胞生長的影響。(3)用攜帶鼠白細胞介素—12基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染

2、的小鼠肝癌H22細胞作為實驗組,以腺病毒轉(zhuǎn)染的H22細胞和未轉(zhuǎn)染的H22細胞為對照組,三種細胞分別被接種到裸鼠腎包膜下,觀察肝癌H22細胞的生長以及肝癌血管的生成情況,RT-PCR法檢測肝癌組織中的血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管生成素—2基因的表達情況。
　　結(jié)果：(1)成功構(gòu)建攜帶鼠白細胞介素—12基因的重組腺病毒,感染復(fù)數(shù)為100、感染時間為2小時條件下重組腺病毒的轉(zhuǎn)染率為96.41%,實驗組細胞培養(yǎng)上清液中檢測到鼠白細胞介素—1

3、2的含量為(89.71±22.05)ng.48h-1.106cells-1,對照組細胞培養(yǎng)上清液中未檢測到鼠白細胞介素—12。(2)在體外,實驗組和對照組H22細胞的大小、形態(tài)、生長增殖、細胞周期無差別(P>；0.05)。(3)在裸鼠體內(nèi),摘除瘤組織時實驗組瘤組織體積較小,出血較對照組少；實驗組血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管生成素—2基因的PCR產(chǎn)物條帶亮度均弱于對照組(P<；0.05)；實驗組血管內(nèi)皮細胞生長因子的PCR產(chǎn)物條帶輝

4、度比值(0.8867±0.1924)低于載體對照組(1.1744±0.1189)和空白對照組(1.1874±0.1752)(P<；0.05)；實驗組血管生成素—2基因的PCR產(chǎn)物條帶輝度比值(0.7878±0.1471)低于載體對照組(1.0319±0.1574)和空白對照組(1.0361±0.1536)(P<；0.05)。
　　結(jié)論：(1)攜帶鼠白細胞介素—12基因的重組腺病毒構(gòu)建正確,轉(zhuǎn)染率較高,能高表達鼠白細胞介素—