mIL-12基因轉(zhuǎn)染抑制裸鼠肝癌血管生成的研究.pdf

1、　　目的：研究腺病毒介導(dǎo)的小鼠白細(xì)胞介素—12基因在體外對(duì)肝癌H22細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,以及在裸鼠體內(nèi)對(duì)肝癌血管生成的抑制。
　　方法：(1)構(gòu)建攜帶鼠白細(xì)胞介素—12基因的重組腺病毒,在體外轉(zhuǎn)染H22細(xì)胞,熒光顯微鏡觀測(cè)轉(zhuǎn)染率,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的鼠白細(xì)胞介素—12含量。(2)應(yīng)用倒置顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)法、改良MTT法、流式細(xì)胞儀觀察重組腺病毒在體外對(duì)H22細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。(3)用攜帶鼠白細(xì)胞介素—12基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染

2、的小鼠肝癌H22細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組,以腺病毒轉(zhuǎn)染的H22細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的H22細(xì)胞為對(duì)照組,三種細(xì)胞分別被接種到裸鼠腎包膜下,觀察肝癌H22細(xì)胞的生長(zhǎng)以及肝癌血管的生成情況,RT-PCR法檢測(cè)肝癌組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和血管生成素—2基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1)成功構(gòu)建攜帶鼠白細(xì)胞介素—12基因的重組腺病毒,感染復(fù)數(shù)為100、感染時(shí)間為2小時(shí)條件下重組腺病毒的轉(zhuǎn)染率為96.41%,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中檢測(cè)到鼠白細(xì)胞介素—1

3、2的含量為(89.71±22.05)ng.48h-1.106cells-1,對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中未檢測(cè)到鼠白細(xì)胞介素—12。(2)在體外,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組H22細(xì)胞的大小、形態(tài)、生長(zhǎng)增殖、細(xì)胞周期無(wú)差別(P>；0.05)。(3)在裸鼠體內(nèi),摘除瘤組織時(shí)實(shí)驗(yàn)組瘤組織體積較小,出血較對(duì)照組少；實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和血管生成素—2基因的PCR產(chǎn)物條帶亮度均弱于對(duì)照組(P<；0.05)；實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的PCR產(chǎn)物條帶輝

4、度比值(0.8867±0.1924)低于載體對(duì)照組(1.1744±0.1189)和空白對(duì)照組(1.1874±0.1752)(P<；0.05)；實(shí)驗(yàn)組血管生成素—2基因的PCR產(chǎn)物條帶輝度比值(0.7878±0.1471)低于載體對(duì)照組(1.0319±0.1574)和空白對(duì)照組(1.0361±0.1536)(P<；0.05)。
　　結(jié)論：(1)攜帶鼠白細(xì)胞介素—12基因的重組腺病毒構(gòu)建正確,轉(zhuǎn)染率較高,能高表達(dá)鼠白細(xì)胞介素—