Ad-p27mt對肝癌細胞及裸鼠移植瘤生成抑制和凋亡的影響.pdf

1、目前認為，腫瘤的發(fā)生主要有兩方面的原因，一是腫瘤細胞的凋亡障礙，二是細胞異常增殖，也就是細胞周期調(diào)控機制紊亂、細胞周期調(diào)控蛋白失調(diào)，導(dǎo)致細胞生長失控。細胞周期受到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和反饋環(huán)路的嚴密調(diào)控，這個過程是否正常與細胞的生長、分化、衰老及癌變密切相關(guān)，因此腫瘤不僅僅是增殖、分化異常的疾病，更是凋亡異常的疾病，調(diào)控細胞增殖和凋亡目前逐漸成為腫瘤治療研究的一個新熱點。P27是新近發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，P27蛋白作為一種調(diào)控細胞周期的樞紐蛋白，

2、可以以多種方式調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖或凋亡。其抗癌機制已成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要研究課題。對p27基因進行修飾，使其編碼的第187位氨基酸(蘇氨酸)突變?yōu)榈鞍彼峄虮彼岫傻耐蛔冃蚿27基因(p27mt)編碼產(chǎn)生的蛋白能抗降解、更穩(wěn)定，具有比野生型p27基因(p27wt)更強的抑制腫瘤細胞生長及誘導(dǎo)凋亡活性。
　　 目的：應(yīng)用Ad-p27mt轉(zhuǎn)染人肝癌細胞SMMC-7721及其裸鼠移植瘤，探討外源性突變型p27對人源性肝癌細胞SMMC

3、-7721和裸鼠移植瘤生長抑制和凋亡的影響。
　　 方法：方法一：將腺病毒介導(dǎo)的突變型p27cDNA(Ad-p27mt)轉(zhuǎn)染人肝癌細胞SMMC-7721，Western blotting檢測p27、Bcl-2、Bax的表達；流式細胞儀(FCM)、H3-TdR 摻入法等觀察Ad-p27mt對肝癌細胞生長抑制作用，DNA片段分析及TUNEL檢測細胞凋亡。方法二：Ad-p27mt注射入肝癌裸鼠移植瘤中，繪制腫瘤生長曲線，計算腫瘤生長抑

4、制率，免疫熒光法檢測p27的表達。
　　 結(jié)果：Ad—p27mt轉(zhuǎn)染肝癌細胞后，p27表達增強，Bax/Bcl-2比例增高,細胞增殖明顯受抑制，G0/G1期細胞比例增加，明顯產(chǎn)生凋亡.采用Ad—p27mt基因治療肝癌裸鼠移植瘤生長受抑制，腫瘤生長抑制率達57.09％。
　　 結(jié)論：Ad-p27mt基因轉(zhuǎn)染對肝癌具有較顯著的體內(nèi)、外抑制作用和誘導(dǎo)凋亡作用，其機制是通過增強p27表達，使細胞產(chǎn)生周期阻滯,誘導(dǎo)凋亡的機理可能是