人EGF-IL-18融合基因的構建、表達及體內外生物活性的研究.pdf

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文人EGF-IL-18融合基因的構建、表達及體內外生物活性的研究姓名：鄭昭璟申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學（醫(yī)學遺傳）指導教師：呂建新;彭穎20060501溫州醫(yī)學院碩士研究生學位論文期和凋亡的監(jiān)測。另一部分腫瘤組織，連同裸鼠的肝、肺、脾等器官一并通過1 0 ％福爾馬林的固定用于常規(guī)病理切片染色和觀察。從健康志愿者抽取靜脈血，密度梯度離心分離外周血單個核細胞( P B M N C s ) 。利用C C K 一8 試劑

2、盒測試E G F ．I L ．1 8 對P B M N C s 的促增殖作用。應用E L I S A 法檢測E G F ．I L ．1 8 誘導K G ．1 細胞分泌I F N —Y 。應用多參數(shù)流式細胞術檢測E G F —I L —1 8 對S M M C 一7 7 2 1 腫瘤抗原和K 5 6 2 細胞抗原致敏的P B M N C s淋巴細胞亞群分布及C D 4 + 和C D 8 + T 細胞活化的影響。應用S P S S1 3 ．

3、0 統(tǒng)計軟件包、P r i s m 4 ．0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，C u r v e E x p e r t1 ．3 免費軟件用于標準曲線的制作。結果在本課題中，我們應用p E T l 2 a 表達載體將E G F ．I L —1 8 融合基因在B L 2 1 ( D E 3 ) 大腸桿菌中進行了高效表達，表達產物經S D S —P A G E 和W e s t e m B l o t分析鑒定與我們的設計相符。經計算機模擬分析，E G

4、 F —I L ．1 8 融合蛋白與I L 一1 8自然成熟胎在分子疏水性、二級結構等理化特性方面相似。瘤周注射E G F —I L 一1 8 合并N K 細胞注射能顯著抑制S M M C 一7 7 2 1 移植瘤的生長。在治療結束時，S M M C 一7 7 2 1 異種移植瘤的體積在E G F ．I L ．1 8 組、r h l L ．1 8 組和空白對照組分別為O ．0 6 3 ±0 ．0 3 0 c m 3 , 0 ．

5、2 1 2 ±0 ．0 3 7 c m 3 , 和0 ．4 3 2 4 - 0 ．0 3 0 c m 3 ，空白對照組與E G F —I L ．1 8 組和r h l L ．1 8 組的差別是比較明顯的( J p < O ．0 1 ) 。此外，r h I L 一1 8 組與E G F —I L 一1 8 組的差別也具有統(tǒng)計學意義( 尸= O ．0 5 ) 。細胞周期分析表明，E G F —I L 一1 8 組有9 6 ．

6、1 1 ±1 ．5 1 ％的細胞停滯在G 1 期，而在r h I L —1 8 組和空白對照組則分別是8 1 ．3 4 - 2 ．0 2 ％和7 2 ．1 8 4 - 0 ．4 6 ％，前者與后兩者相比均有明顯的差異( E G F ．I L 一1 8 V Sr h I L 一1 8 ：P < 0 ．0 5 ；E G F —I L 一1 8 V Sc o n t r o l ：P < 0 ．0 1 ) 。同時，r h

7、 I L 一1 8組與空白對照組相比也有明顯差異( P < 0 ．0 5 ) 。E G F ．I L ．1 8 組、r h l L 一1 8 組和空白對照組S 期細胞的比例分別為3 ．6 9 4 - 0 ．4 1 ％，1 6 ．5 l ±1 ．2 5 ％，和2 3 ．8 5 ±1 ．3 6 ％，前者與后兩者相比均有明顯的差異( E G F ．I L ．1 8 Y S r h l L ．1 8 ：P < 0

8、 ．0 1 ；E G F ．I L 一1 8 U Sc o n t r o l ：P < 0 ．0 1 ) 。同時，r h l L ．1 8 組與空白對照組相比也有明顯差異( P < O ．0 5 ) 。舯瘤細胞自主凋亡發(fā)生率在三組中也有明顯不同，與空白對照組( 7 ．1 0 + 1 ．1 3 ％)械B ，E G F —I L - 1 8 組( 2 8 ．0 5 4 - 3 ．8 9 ％，P < O ．0 5 ) 、r