人IL-24基因的克隆、表達及活性鑒定.pdf

1、目的:克隆人IL-24基因,在原核和真核系統(tǒng)中進行重組表達并檢測表達蛋白的生物學活性.方法:采用RT-PCR技術克隆人IL-24基因.將其重組到pUC19質(zhì)粒,經(jīng)測序鑒定后,構建重組質(zhì)粒pBV220-hIL-24和pcDNA3-hIL-24.經(jīng)鑒定后分別導入原核和真核細胞進行表達.然后分別用SDS-PAGE、MTT、RT-PCR、FCM、TUNEL及ELISA等方法鑒定hIL-24基因的表達和研究表達產(chǎn)物的功能及生物學活性.結果:成功獲

2、得621bp的人IL-24基因,序列測定結果與GenBank報道的完全一致,原核和真核重組表達質(zhì)粒構構建正確,原核表達產(chǎn)物經(jīng)透析復性和初步純化后,通過MTT、TUNEL和FCM等方法檢測發(fā)現(xiàn)所表達的rhIL-24具有誘導A549肺腺癌細胞凋亡的作用.結果顯示hIL-24基因不僅可在COS-7和CHO兩種細胞中表達,而且表達的rhIL-24具有較強的誘導A549肺腺癌細胞凋亡的作用.結論:該基因系國內(nèi)首次獲得并經(jīng)序列測定證實的hIL-24