條件增殖腺病毒介導(dǎo)IL-24及Ki-67基因RNAi抗腫瘤研究.pdf

1、目的: 研究條件增殖腺病毒介導(dǎo)的IL-24及Ki-67基因RNAi對人腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 方法: 培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株7402、膀胱癌細(xì)胞株BIU-87，將不同MOI的ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP感染兩種腫瘤細(xì)胞株，分別于不同時間收集腫瘤細(xì)胞。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測IL-24及Ki-67 mRNA表達(dá)；蛋白印跡(Western b

2、lot)和免疫組化法檢測條件增殖腺病毒E1A、IL-24及Ki-67蛋白表達(dá)；結(jié)晶紫染色觀察細(xì)胞毒效應(yīng)：MTT檢測細(xì)胞增殖；TNUEL檢測細(xì)胞凋亡。 結(jié)果: 1.10MOI、48h處理?xiàng)l件下，蛋白印跡(Western blot)及免疫組化法證實(shí)ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP組中均表達(dá)E1A蛋白，表明攜帶IL-24及Ki-67 RNAi的條件增殖腺病毒

3、可在人肝癌細(xì)胞株7402及膀胱癌細(xì)胞株BIU-87中復(fù)制。 2.10MOI、48h處理?xiàng)l件下，RT-PCR檢測ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP組發(fā)現(xiàn)：(1) 僅ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24組表達(dá)IL-24mRNA，兩種處理組的灰度分析比值7402細(xì)胞為1:2.1、BIU-87細(xì)胞為1:2.5，以ZD55-IL-24組表達(dá)量最大

4、；(2) 與對照組相比，ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP處理組Ki-67mRNA表達(dá)均降低：7402細(xì)胞為(65.6±3.2)％ vs (80.3±2.1)％ vs (36.3±3.4)％ vs (86.8±1.9)％，BIU-87細(xì)胞為(52.7±1.8)％vs(72.9±2.9)％vs(31.3±1.6)％vs(78.9±2.5)％，Ki67 mRNA表達(dá)量依次為

5、ZD55-EGFP>ZD55-IL-24>ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-Ki67。 3.10MOI、48h處理?xiàng)l件下，Western blot檢測ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP組發(fā)現(xiàn)：(1) 僅在ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24組表達(dá)IL-24蛋白，灰度分析比值7402細(xì)胞為1:1.7，BIU-87細(xì)胞為1

6、:1.9；(2) 與對照組相比，各組的Ki-67蛋白表達(dá)均降低，7402細(xì)胞為(61.7±1.8)％vs(81.3±2.5)％vs(39.6±3.1)vs(88.2±1.6)％，BIU-87細(xì)胞為(50.6±2.6)％vs(76.3±1.7)％vs(34.5±2.4)％vs(82.6±1.9)％，Ki67蛋白表達(dá)依次為ZD55-EGFP>ZD55-IL-24>ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-Ki67。 4.1

7、0MOI、48h處理?xiàng)l件下，免疫組化法檢測ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-1067、ZD55-EGFP組發(fā)現(xiàn)：(1) 僅在ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24組IL-24蛋白呈陽性表達(dá)，7402細(xì)胞為(30.9±3.2)％vs(50.4±2.3)％，BIU-87細(xì)胞為(32.8±1.6)％vs(54.2±2.5)％；(2) 與陰性對照相比，各組的Ki-67蛋白表達(dá)陽性率

8、均降低，7402細(xì)胞為(73.2±1.6)％vs(87.5±1.9)％vs(41.6±2.6)％vs(90.9±1.5)％，BIU-87細(xì)胞為(54.6±2.0)％vs(78.2±42.8)％vs(38.5±2.9)％vs(87.7±2.1)％，Ki67蛋白表達(dá)陽性率依次為ZD55-EGFP>ZD55-IL-24>ZD55-IL-24+ZD55-1067>ZD55-1067。 5.MTT顯示不同處理組對7402、BIU-87細(xì)胞

9、增殖抑制作用依次為ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-IL-24>ZD55-Ki67>ZD55-EGFP。 6.TUNEL及結(jié)晶紫觀察不同處理組誘導(dǎo)7402、BIU-87細(xì)胞凋亡能力依次為ZD55-IL-24+ZD55-Ki67>ZD55-IL-24>ZD55-Ki67>ZD55-EGFP。 結(jié)論: 攜帶IL-24及Ki-67 RNAi的條件增殖腺病毒可在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制，聯(lián)合兩種攜帶不同靶基因的病毒能夠更