p120及NF-κB在香煙煙霧刺激后人氣道上皮細胞中的表達變化及相關(guān)機制.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　通過建立香煙煙霧提取物(CSE)損傷氣道上皮的體外模型,觀察在氣道上皮損傷修復(fù)過程中p120以及NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的表達變化,從而對氣道炎癥發(fā)生過程中的相關(guān)機制進行初步探討。
　　實驗方法：
　　使用不同濃度的香煙煙霧提取物(CSE)刺激培養(yǎng)的人氣道上皮細胞(HBE)建立體外氣道上皮損傷模型;采用CCK-8試劑盒檢測CSE的毒性對培養(yǎng)細胞增殖活性的影響;倒置相差顯微鏡下觀察 CSE對培養(yǎng)細胞形態(tài)

2、的影響;Western blot法檢測CSE刺激后培養(yǎng)細胞內(nèi)p120、NF-κB p65、IκBα及p-IκBα等蛋白表達量的變化。
　　實驗結(jié)果：
　　1.CSE刺激對培養(yǎng)細胞的活力影響
　　本實驗選用了5個實驗濃度,分別為1％、5％、10％、15％、30％。每組做6個復(fù)孔,重復(fù)三次。實驗結(jié)果表明:較低濃度的香煙煙霧提取物(1％)對細胞活性影響不明顯,但隨著香煙煙霧提取物濃度增高至5％,培養(yǎng)細胞的增殖活性即開始降低,

3、至15％時,培養(yǎng)細胞的增殖活力明顯降低。
　　2.CSE刺激引起的培養(yǎng)細胞形態(tài)學(xué)改變
　　對照組培養(yǎng)的HBE細胞立體感強,細胞間連接緊密,呈典型的上皮細胞鋪路石樣形態(tài)。香煙煙霧提取物處理組HBE細胞變得較為伸展和扁平,立體感減弱,細胞間隙增寬。當增加香煙煙霧提取物濃度時,培養(yǎng)細胞的這種變化更為明顯。而更高濃度(CSE濃度30％)時,大部分培養(yǎng)細胞胞體皺縮、變圓,細胞間連接喪失,死細胞增多。
　　3.CSE刺激引起培養(yǎng)細

4、胞內(nèi)多種蛋白的表達變化
　　(1)在正常培養(yǎng)的人氣道上皮細胞中p120表達豐富,經(jīng)不同濃度的香煙煙霧提取物(1％、3％、5％、10％、15％)刺激后,培養(yǎng)細胞p120表達呈現(xiàn)減少趨勢,且具有濃度依賴性。
　　(2)不同濃度的香煙煙霧提取物(1％、3％、5％、10％、15％)的刺激均可引起人氣道上皮細胞內(nèi)NF-κB p65總蛋白的表達增加,具有濃度依賴性。
　　(3)不同濃度的香煙煙霧提取物(1％、3％、5％、10％、1