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文檔簡介
1、目的：以體外培養(yǎng)的大鼠淚腺上皮細胞為模型，自制糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)，觀察AGEs對大鼠淚腺上皮細胞氧化應激及NF-kB活性的影響。 方法： 1.采用酶消化法培養(yǎng)原代大鼠淚腺上皮細胞。 2.糖孵育法制備牛血清白蛋白的AGEs。 3.以不同濃度的AGEs(12.5、25、50、100、2001ag/ml)與淚腺上皮細胞作用48小時，再選取敏感濃度組100μg/ml AGEs分別作用淚腺上皮細胞12、24
2、、48小時，用分光光度法測量細胞內(nèi)丙二醛含量(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活力，western blot法檢測胞核NF-κBp65蛋白的表達。 結(jié)果： 1.所培養(yǎng)的第2代大鼠淚腺上皮細胞純度可達85％以上。 2.熒光分光光度法鑒定AGEs-BSA的熒光值：PBS調(diào)零，激發(fā)波長390nm，發(fā)射波長450nm，峰狹5nm。 3.AGEs以濃度和時間依賴性增加淚腺上皮細胞內(nèi)丙二醛含量，同時降低超氧化物歧化
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